DB37/T 3560-2019 荷斯坦牛致死单倍型（HH1、HH3、HH4和HH5）基因检测技术规程

ICS65.020.01

B40

DB37

山东省地方标准

DB37/T3560—2019

荷斯坦牛致死单倍型（HH1、HH3、HH4和HH5）

基因检测技术规程

Codeofpracticeformoleculardetectionoflethalhaplotypes(HH1,HH3,HH4and

HH5)inHolstein

2019-05-29发布2019-06-29实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T3560—2019

目次

前言................................................................................II

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3术语和定义.........................................................................1

4检测原理...........................................................................2

4.1荷斯坦牛致死单倍型HH1、HH3和HH4的检测........................................2

4.2荷斯坦牛致死单倍型HH5的检测...................................................2

5主要试剂...........................................................................2

6主要仪器设备.......................................................................2

7检测方法...........................................................................2

7.1样本采集.......................................................................2

7.2DNA提取........................................................................2

7.3DNA浓度和纯度检测..............................................................3

7.4引物序列.......................................................................3

7.5PCR扩增........................................................................3

7.6PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测......................................................3

7.7测序分析.......................................................................3

8结果判定...........................................................................3

8.1致死单倍型HH1测序结果判定与表述...............................................3

8.2致死单倍型HH3测序结果判定与表述...............................................4

8.3致死单倍型HH4测序结果判定与表述...............................................4

8.4致死单倍型HH5扩增条带判定与表述...............................................5

9废弃物的处理.......................................................................5

10检测过程中防止交叉污染的措施......................................................5

附录A（资料性附录）主要试剂....................................................6

附录B（资料性附录）主要仪器设备................................................7

附录C（规范性附录）PCR扩增产物.................................................9

I

DB37/T3560—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院奶牛研究中心、山东省畜牧总站、威海市畜牧兽医局、山东奥

克斯畜牧种业有限公司、江苏省农业科学院畜牧研究所。

本标准主要起草人：黄金明、鞠志花、王秀革、张思聪、赵国清、高亚平、魏晓超、姜强、刘文浩、

张亚冉、李荣岭、李建斌、高运东、曲绪仙、侯明海、仲跻峰。

II

DB37/T3560—2019

荷斯坦牛致死单倍型（HH1、HH3、HH4和HH5）基因检测技术规程

1范围

本标准规定了荷斯坦牛四种致死单倍型（HH1、HH3、HH4和HH5）的检测方法和结果判定。

本标准适用于荷斯坦牛四种致死单倍型（HH1、HH3、HH4和HH5）的检测与诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T19495.2—2004转基因产品检测实验室技术要求

GB/T27642—2011牛个体及亲子鉴定微卫星DNA法

NY/T1672—2008绵羊多胎主效基因FecB分子检测技术规程

NY/T2695—2015牛遗传缺陷基因检测技术规程

DB37/T2037—2012牛白细胞黏附缺陷症（BLAD）基因分子检测技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

荷斯坦致死单倍型1Holsteinlethalhaplotype1，HH1

由牛第5号染色体的凋亡蛋白酶激活因子1（Apoptoticprotease-activatingfactor1，APAF1）

基因产生的终止突变（g.63150400C＞T；rs448942533；牛参考基因组UMD3.1）引起的一种隐性遗传缺

陷。当突变等位基因纯合时，个体致死，大多数表现为妊娠早期流产，不易被观察，在健康奶牛群体中

无纯合的HH1单倍型。

3.2

荷斯坦致死单倍型3Holsteinlethalhaplotype3，HH3

由牛第8号染色体的染色体结构维持2（Structuralmaintenanceofchromosomes2，SMC2）基因

一个错义突变（g.95410507T＞C；rs456206907；牛参考基因组UMD3.1）引起的一种隐形遗传缺陷，与

乳蛋白、繁殖年限、青年牛受胎率、母牛受胎率有关,当突变的等位基因纯合时致死。

3.3

荷斯坦致死单倍型4Holsteinlethalhaplotype4，HH4

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