DB37/T 4053-2020 新城疫病毒基因VII型荧光定量PCR检测方法

ICS11.220

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T4053—2020

新城疫病毒基因VII型荧光

定量PCR检测方法

Real-timePCRassayforthedetectionofgenotypeVIInewcastlediseasevirus

2020-07-09发布2020-08-09实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T4053—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学家禽研究所。

本标准主要起草人：孟凯、吴家强、宋敏训、袁小远、张玉霞、杨金兴、艾武、王友令、亓丽红。

I

DB37/T4053—2020

新城疫病毒基因VII型荧光定量PCR检测方法

1范围

本标准规定了新城疫病毒基因VII型（NDV）荧光定量PCR检测方法。

本标准适用于鸡咽喉和泄殖腔拭子及脑、肺脏、脾脏等组织中新城疫病毒基因VII型的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3试验原理

实时荧光定量PCR检测是在PCR反应体系中，除采用特异的引物外，还加入了与DNA双链非特异性结

合的SYBRGreenI荧光染料。当它与DNA双链结合时，发出荧光，从DNA双链上释放出来时，荧光信号急

剧减弱。随着PCR反应的进行，每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变

化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线。

4试剂或材料

除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水为GB/T6682规定的一级水。

4.110×磷酸盐缓冲液PBS：pH值7.2。

4.2研钵。

4.3病毒RNA提取试剂盒。

4.4SYBRGreenIRT-PCR缓冲液。

4.5酶混合物：内含MLV反转录酶和RNaseInhibitor。

4.6DNA聚合酶。

4.7阳性对照：浓度为1.0×105拷贝/μL的阳性质粒。

4.8阴性对照：水。

4.9DEPC水。

5仪器设备

5.1微量可调移液器：最大量程为