T/ZGKSL 010-2023 重组胶原蛋白原料质量要求及功效评价方法
T/ZGKSL 010-2023 Recombinant Collagen Raw Material Quality Requirements and Efficacy Evaluation Methods
基本信息
发布历史
-
2023年04月
研制信息
- 起草单位：
- 江苏创健医疗科技股份有限公司、广东丸美生物技术股份有限公司、广州启妆生物科技有限公司、润辉生物技术（威海）有限公司、广东完美生命健康科技研究院有限公司、吉林省国大生物工程有限公司、广州市暨源生物科技有限公司、江苏吴中美学生物科技有限公司、杭州纽龙生物科技有限公司、华熙生物科技股份有限公司、南方医科大学皮肤病医院、予态（上海）生物科技有限公司、江苏江山聚源生物技术有限公司、萃蕤科实业（上海）有限公司、汉肽生物医药集团有限公司、广州蛋壳网络科技有限公司、南京诺唯赞健康科技有限公司、上海幸研生物科技有限公司、包头东宝生物技术股份有限公司、陕西慧康生物科技有限责任公司、山西锦波生物医药股份有限公司、圣凯西（上海）生物科技有限公司、芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司、上海上美化妆品股份有限公司、河北纳科生物科技有限公司、海孵（海南自贸区）医疗科技有限责任公司、广州暨南大学医药生物技术研究开发中心有限公司、暨南大学、哈尔滨敷尔佳科技股份有限公司、英格尔检测技术服务（上海）有限公司、江苏亨瑞生物医药科技有限公司
- 起草人：
- 李海航、纪白慧、李佳佳、孙云起、郭朝万、熊盛、陈伟、姬胜利、殷金岗、毛新亮、苏敦、陈晨、戴欣、黄亚东、赵澎、项臻、李艳章、钱永常、秦倩茹、郭学平、周伟、付杰、周伟、杨斌、叶理、李欣然、范婷、丁亚芳、曾理、殷世清、姜寿俊、陈志胜、侯森、曹泽彧、UMAR SHAFIU ADAM、宁德正、王富荣、郭燕川、高恩、王建、林如妹、赵俊、陶侃、徐兰举、骆辉、项琪、王巍、张立国、张大为、钱强
- 出版信息：
- 页数：10页 | 字数：- | 开本： -
内容描述
ICS71.100.70
CCSY42
团体标准
T/ZGKSL010-2023
重组胶原蛋白透皮吸收测定方法
Testmethodforabsorptionofrecombinantcollagenthroughtheskin
2023-09-22发布2023-09-22实施
中国抗衰老促进会发布
T/ZGKSL010-2023
目 次
前 言..............................................................................II
1范围.................................................................................1
2规范性引用文件.......................................................................1
3术语和定义...........................................................................1
4定性定量方法.........................................................................1
4.1基本要求.........................................................................1
4.2定性方法——荧光标记法...........................................................1
4.3定量方法——扩散池法.............................................................4
5试验报告.............................................................................6
参考文献............................................................................7
I
T/ZGKSL010-2023
前 言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起
草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中国抗衰老促进会提出并归口。
本文件起草单位：西安巨子生物基因技术股份有限公司、西北大学、中国科学院过程工程研究所、
陕西慧康生物科技有限责任公司、江苏江山聚源生物技术有限公司、江苏创健医疗科技股份有限公司、
陕西省药品技术审评中心。
本文件主要起草人：范代娣、史静静、段志广、张贵锋、张若冰、李元、徐丽明（原单位：中国食
品药品检定研究院）、范婷、李佳佳、严建亚、贾利平、刘彦楠、高建萍、罗琳娜。
II
T/ZGKSL010-2023
重组胶原蛋白透皮吸收测定方法
1范围
本文件提供了化妆品领域用重组胶原蛋白原料透皮吸收的定性和定量分析方法。
本文件适用于定性或定量评价化妆品领域用重组胶原蛋白原料透皮吸收的能力。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB/T27818化学品皮肤吸收体外试验方法
YY/T1849重组胶原蛋白
《中华人民共和国药典》
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
重组胶原蛋白recombinantcollagen
采用重组DNA技术，对编码所需人胶原蛋白质的基因进行遗传操作和（或）修饰，利用质粒或病
毒载体将目的基因带入适当的宿主细胞（细菌、酵母或其他真核细胞等）中，表达并翻译成胶原蛋白或
类似胶原蛋白的多肽，经过提取和纯化等步骤制备而成。
[来源：YY/T1849,3.2]
4定性定量方法
4.1基本要求
本文件给出了用于重组胶原蛋白透皮吸收的定性分析方法和相对定量分析方法。宜先进行定性分析，
其结果为有透皮吸收的情况时再进行定量分析；若定性分析结果没有透皮吸收则没有必要进行定量分析。
4.2定性方法——荧光标记法
4.2.1原理
异硫氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate，FITC）被广泛用于在蛋白质氨基上附加荧光标签。当
FITC在碱性溶液中与蛋白质反应时，异硫氰酸酯基团与蛋白游离的伯氨基反应，形成FITC-蛋白质结合
物，在荧光灯源紫外线或蓝紫光激发下产生黄绿色荧光，发射波长为525nm，激发波长为495nm，
通过在荧光显微镜下观察对相应蛋白进行定性、定位分析。本文件依据FITC标记蛋白的原理对重组胶
原蛋白进行标记，以评价重组胶原蛋白的透皮吸收特性。
4.2.2试剂、材料、仪器和设备
1
T/ZGKSL010-2023
所用试剂均为分析纯。
a）试剂和材料如下：
1）FITC；
2）碳酸钠；
3）碳酸氢钠；
4）二甲基亚砜（DMSO）；
5）氯化铵（NH4Cl）；
6）市售脱毛膏；
7）试验动物：白化豚鼠或SD大鼠，雌雄不限，周龄为8周，体重250g~300g。
注：若选择其他皮肤模型如组织工程3D皮肤等需自行验证。
b）仪器和设备如下：
1）分析天平，感量0.0001g；
2）凝胶色谱分离柱；
注：根据重组胶原蛋白的分子量大小选择合适孔径填料的色谱柱。
3）蛋白纯化系统；
4）宠物电推剪；
5）冷冻切片机；
6）荧光倒置显微镜。
4.2.3重组胶原蛋白-FITC标记物的制备
4.2.3.1溶液配制
溶液配制如下：
a）碳酸钠缓冲液（0.1M，pH9.0）：称取0.106g无水碳酸钠、0.756g碳酸氢钠加水溶解，调
pH至9.0，定容至100mL备用（现配现用）；
b）FITC溶液：溶解FITC于无水DMSO中，配制成1mg/mL的溶液，体积为1.5mL；
c）NH4Cl溶液（1M）：称取0.535gNH4Cl加0.1M碳酸钠缓冲液（pH9.0）溶解，定容至10mL。
4.2.3.2试验步骤
具体试验操作可同时参考所使用的
定制服务
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