GB/T 5521-1989 谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定 比色法

中华人民共和国国家标准

谷物和谷物产品a-淀粉

酶活性的测定比色法GB5521一89

代替GB5521-85

Methodfordeterminationofalpha-amylase

activityincerealandcerealproducts-

Colorimetricmethod

本标准等效采用国际标准ISO3983-1977《谷物和谷物产品a-淀粉酶活性的测定比色法》。

1主题内容和适用范围

本标准规定了用比色法测定谷物和谷物产品a一淀粉酶活性所用仪器、试剂、分析步骤和结果计

算。

本标准适用于测定谷物和谷物产品a一淀粉酶活性，也可用于测定源于真菌或细菌的a-淀粉酶干

粉的活性。

2定义

1L溶剂从1g样品中所提取的酶，在规定条件下，每秒钟降解1.024x10-5单位的刀一极限糊精

底物溶液，则该样品的a一淀粉酶活性等于一个单位，极限糊精是被fi-淀粉酶完全降解了的淀粉产

物。

3原理

酶降解刀一极限糊精底物溶液，经过不同的反应时间，将反应混合物等分加到碘溶液中。随着反

应时间的增加而使颜色强度降低，以测定酶活性。

4试剂

4.1碘(GB678-77)1

4.2碘化钾(GB1272-77)1

4.3冰乙酸(GB676-78);

4.4硫酸(GB625-78),

4.5无水乙酸钠(GB694-81)t

4.6抓化钙;

4.了可溶性淀粉、‘

注:1)可采用Liatner淀粉或质里相当的国产可溶性淀粉。浙江菱湖化工试剂厂产品符合要求。

4.8浮石粉，

4.，碘贮备液:

称取11.0g碘化钾溶于少量水中，加入5.509结晶碘，搅拌至碘完全溶解。再定容至250mL，置

于棕色瓶中，在暗处贮存，此溶液可保存一个月;

4.10碘稀释液:

称取40.09碘化钾溶于水中，加4.00mL碘贮备液，并稀释至1L，用时现配，不可过夜，

中华人民共和国商业部1988一12-31批准1989一09;一01实施

CB5521一.8

4.11缓冲液:

称取164g无水乙酸钠溶于水中，加人120mL冰乙酸用水定容至1L,

4.120.2%(m/犷)氛化钙溶液，

4.130.05mol/L硫酸溶液;

4.14fl-淀粉酶溶液:

称取log有酶活性的黄豆粉(粗细度为通过1.5mm孔筛)，加人85rnL水和15mLO.05mol/L硫

酸充分搅匀，静置15min，抽滤，该滤液用于制备冬极限糊精底物溶液;

4.15,B一极限糊精底物溶液:

称取5.00g(于基)可溶性淀粉于小烧杯中，加人约20mL水混匀，将其边搅拌边缓慢倒人盛有

100mL沸水的500mL高型烧杯中，并用洗瓶将小烧杯中的淀粉全部转移至高型烧杯中，继续搅拌并

加热，缓慢煮沸2min。加盖表面皿，在自来水中冷却至30℃以下，加入25mL缓冲溶液及50mL刀-

淀粉酶液，在室温下放置20h，加人1勺浮石粉，将此溶液在1Omin之内缓慢煮沸，然后继续沸腾

5min以上。冷却至300C以下，用水定容至250mL,摇匀，过滤。滤液中加几滴甲苯，此溶液的pH

值应为4.7t0.1，在25℃以下可连续使用五天。

5仪器

5.1恒温水浴，30士0.1℃。

5.2恒温水浴，2010.1℃。

5.3分光光度计或比色计，

石.4秒表.