DB22/T 2629-2017 猪肠道微孢子虫检测 聚合酶链式反应（PCR）法

ICS11.220

B41

备案号：56330-2017DB22

吉林省地方标准

DB22/T2629—2017

猪肠道微孢子虫检测聚合酶链式反应

（PCR）法

Detectionmethodofpolymerasechainreaction(PCR)ofEnterocytozoonbieneusiin

pigs

2017–06-12发布2017-08-12实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T2629—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。

本标准主要起草人：曹利利、郭衍冰、姚新华、苑淑贤、程荣华、姚琳、董航、邵洪泽。

I

DB22/T2629—2017

猪肠道微孢子虫检测聚合酶链式反应（PCR）法

1范围

本标准规定了猪肠道微孢子虫PCR检测方法的技术要求。

本标准适用于猪肠道微孢子虫的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

3.1

猪肠道微孢子病Intestinalmicrosporidiosisofpig

由肠道微孢子虫(Enterocytozoonbieneusi)引起的猪的一种以腹泻为主要特征的人兽共患病。

4试剂、材料

4.1试剂

除另有规定，本标准所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682的双重蒸馏水（ddH2O）。

4.1.1粪便DNA提取试剂盒

4.1.210mg/mL溴化乙锭（EB）溶液（见附录A.1）

4.1.350×TAE电泳缓冲液（见附录A.2）

4.1.41.5%琼脂糖凝胶（见附录A.3）

4.1.5上样缓冲液（见附录A.4）

4.1.610×PCR缓冲液（见附录A.5）

4.1.7200U或2U/μLTaqDNA聚合酶

4.1.810mMdNTPs

4.1.9标准分子量DL2000Marker

4.1.101.4g/mLCsCl溶液（见附录A.7）

4.1.11猪肠道微孢子虫阳性对照：肠道微孢子虫基因组DNA（10ng/μL）。

4.1.124条引物序列及浓度见表1。

1

DB22/T2629—2017

表1引物序列及浓度

使用浓度

引物引物序列

nmol/μL

OUT-F5’-GATGGTCATAGGGATGAAGAGCTT-3’

OUT-R5’-AATACAGGATCACTTGGATCCGT-3’

10

IN-F5’-AGGGATGAAGAGCTTCGGCTCTG-3’

IN-R5’-AATATCCCTAATACAGGATCACT-3’

4.2材料

4.2.1