LY/T 2428-2015 杉木组织培养育苗技术规程

ICS65.020.20

B61

中华人民共和国林业行业标准

/—

LYT24282015

杉木组织培养育苗技术规程

TechnicalreulationfortissuecultureofCunninhamialanceolata

gg

ㅤㅤㅤㅤ

2015-01-27发布2015-05-01实施

国家林业局发布

/—

LYT24282015

杉木组织培养育苗技术规程

1范围

、、、、、

本标准规定了杉木组织培养育苗技术的外植体培养基接种组织培养移栽与苗木管理苗木调

、。

查和出圃技术档案

本标准适用于杉木组织培养育苗生产。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/育苗技术规程

GBT6001

/容器育苗技术

LYT1000

/林木组织培养育苗技术规程

LYT1882

3外植体

3.1母株选择ㅤㅤㅤㅤ

外植体的供体母株应是杉木良种的优树原株或其无性系分株。

3.2外植体采集

3.2.1采集时间

宜在春季或冬季晴好天气采集。

3.2.2采集部位及方法

,、、

母株根颈部或经截干处理的干基部15cm左右长的萌芽条截取半木质化生长健壮无病虫害的

萌芽条作外植体。

3.2.3保藏

,,,

外植体采集后宜用保湿材料包扎用配备冰袋的塑料泡沫保鲜箱低温保藏保藏期不宜超过2d~

3d。

3.3表面灭菌

3.3.1清洗

,。

用中性洗洁剂溶液洗净外植体表面用清水冲洗30min~60min

3.3.2灭菌

,,;

在超净工作台中用酒精浸泡外植体倒去酒精后用无菌水漂洗次再用升

75%8s~10s10.1%

1

/—

LYT24282015

,,

汞加滴滴表面活性剂吐温浸没外植体并不断轻摇以除去气泡时间宜控制在

3~5-206min~

,,,。

倒去升汞溶液后用无菌水漂洗次次每次

10min4~55min

4培养基

4.1培养基类别

、,。

培养基分为诱导培养基继代培养基和生根培养基配方见附录A

4.2培养基配制

培养基配制方法见/。

LYT1882

5接种

5.1准备

5.1.1接种人员保洁

,,,、,。

接种操作人员进入接种室前在缓冲间更换拖鞋穿接种服戴帽子口罩用洗洁剂洗净手

5.1.2物品灭菌

、、,、

接种器械接种器皿纱布等物品使用前应先进行湿热灭菌在蒸汽压力为0.105MPa温度121℃

,。

的条件下灭菌时间为15min~20min

ㅤㅤㅤㅤ

5.1.3接种室灭菌

按如下步骤进行接种室灭菌:

)、,在关闭紫外灯

a接种人员先打开超净工作台接种室和缓冲间的紫外灯进行灭菌30min

15min后人员方可进入接种室。

)、

b接种人员对超净工作台上的工具台面和两侧挡板用75%酒精或0.1%新洁尔灭进行擦拭灭

,。

菌灭菌后对超净工作台开机通风30min

)在开始接种前打开接种用电热灭菌器。

c15min

5.1.4母瓶和培养基准备

,、、。

对母瓶进行检查发现污染裂瓶裂盖立即剔除母瓶和转接培养容器用75%酒精表面擦拭灭菌

,。

后置于超净工作台边备用

5.2接种操作

5.2.1消毒

接种人员在接种操作前用75%酒精对手部进行擦拭消毒。

5.2.2灭菌

。,、、

接种操作过程要对接种器械进行灭菌使用过的器皿要更换使用过的刀剪镊子等接种器械用

,,。:

75%酒精浸湿的无菌纱布擦净后重新灭菌后晾放备用避免交叉污染灭菌选用下列方法之一

),。

a使用酒精灯灭菌接种器械在酒精灯火焰外焰上灼烧10s以上

2

/—

LYT24282015

),。

b使用电热灭菌器灭菌接种器械插入280℃~290℃的导热石英珠中灭菌15s以上

5.2.3接种方法

,。

接种操作时接种器械在接种器皿的斜上方操作将培养材料切割后接种到培养基上接种材料与

,,。,、、

培养基要接触良好深浅适中分布均匀接种后及时盖好容器盖注明品种代号培养基类型人员编

号和接种日期。

5.2.4接种后处理

、,。

熄灭酒精灯或关闭电热灭菌器清洁超净工作台和接种室最后关闭超净工作台及电源

6组织培养

6.1诱导培养

6.1.1外植体接种

,。

外植体灭菌后切成1.0cm~1.5cm茎段垂直或斜插接种到诱导培养基

6.1.2芽诱导

在诱导培养基中诱导出芽后转接至继代培养基。

6.1.3培养条件

ㅤㅤㅤㅤ

。,。

培养室的温度控制在25℃±2℃接种后需暗培养4d~6d再转入光照培养光照培养每天光

,。

照时间为12h~14h光照强度为1500lx~2000lx

6.2继代培养

6.2.1继代接种

将外植体诱导出的芽,;

或继代增殖的芽切割后接种到继代培养基250mL培养瓶接种量为丛生芽

//。

不少于丛瓶或芽数不少于个瓶

612

6.2.2继代周期

,。

每隔30d~35d将继代苗转接至新鲜培养基培养条件见6.1.3

6.2.3继代苗质量要求

继代苗质量要求如下:

),、、。

a叶色墨绿或灰绿茎叶无玻璃化白化褐化

b)继代增殖系数大于2.0。

)茎叶切口无烫伤。

c

d)无污染。

6.2.4继代培养代数

继代培养控制在代内。

25

3