DB51/T 818-2008 马铃薯脱毒种薯生产技术规程

ICS65.020.20

B23DB51

四川省地方标准

DB51/T818—2008

马铃薯脱毒种薯生产技术规程

TechnicalProceduresofVirus-freeSeedPotatoProduction

2008-6-6发布2008-9-1实施

四川省质量技术监督局发布

DB51/T818—2008

目次

前言Ⅱ

1.范围1

2.规范性引用文件1

3.术语和定义1

4.脱毒组培苗快繁2

5.原原种生产3

6.原种生产4

7.脱毒种薯繁育体系（见附录G）4

附录AMS培养基贮备液的配制5

附录B（规范性附录）酶联免疫吸附试验法6

附录C（规范性附录）往复双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法8

附录D种薯切块操作程序12

附录E主要病虫害防治12

附录F（规范性附录）马铃薯主要虫害症状与防治方法13

附录G脱毒种薯繁育体系15

I

DB51/T818—2008

前言

本标准附录B、附录C、附录F为规范性附录。

本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准由四川省农业技术推广总站、成都市农林科学院作物研究所负责起草。

本标准主要起草人：陈涛、章锐、周孝强、梁南山、何卫等。

II

DB51/T818—2008

马铃薯脱毒种薯生产技术规程

1范围

本规程规定了马铃薯脱毒苗的培育、繁殖，各级脱毒种薯的生产、扩繁栽培和各级脱毒种薯的检验、

收获、贮藏等技术操作规程。

本规程适用于四川省马铃薯脱毒种薯生产。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的

修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB3243-82马铃薯种薯生产技术操作规程

GB7331-2003马铃薯种薯产地检疫规程

GB18133-2000马铃薯脱毒种薯

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1脱毒组培苗（Virus-freein-vitroplantlets）

简称脱毒苗，是应用茎尖组织培养技术获得的、经检测确认不带马铃薯卷叶病毒（PLRV）、马铃薯

Y病毒（PVY）、马铃薯A病毒（PVA）、马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯M病毒（PVM）或马铃薯S

病毒（PVS）等病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）的再生试管苗，经过组织培养方法大量扩繁的

且不带上述病毒和类病毒用于生产原原种的试管苗。

3.2试管薯(In-vitromicrotuber)

脱毒苗经诱导培养，直接在试管(或瓶)内结的小薯。

3.3扦插苗(Trans-plants)

脱毒苗切段在网室扦插成活或马铃薯试管薯直播于网室出苗后，剪取其主茎及侧枝顶端扦插成活的

苗。

3.4脱毒种薯(Virus-freeseedpotato)

从繁殖脱毒苗开始，经逐代繁殖增加种薯数量的种薯生产体系生产出来的各级种薯。

脱毒种薯分为原原种、原种、生产用种薯。

3.4.1原原种(Pre-basicseed)（脱毒小薯）

利用组培苗或系选苗（clonalselection）在防虫网室和温室条件下生产出来的、不带马铃薯病毒、

类病毒及其他马铃薯病虫害的、质量在1g～10g之间的小薯。

3.4.2原种(Basicseed)

用原原种作种薯，在良好隔离条件下生产的符合质量标准的种薯。

3.4.3生产用种薯(Certifiedseed)

用原种或其加代繁殖一代后作种薯，在隔离条件下生产出的符合一级种薯质量标准的种薯。

3.5病毒病株允许率(Maximumvirus-infectedplantpercentageallowed)

脱毒种薯繁殖田中病毒病株的允许百分率。

3.6细菌病株允许率(Maximumbacterial-infectedplantpercentageallowed)

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脱毒种薯繁殖田中细菌病株的允许百分率。

3.7真菌病株及其它病株允许率(Maximumfungalorotherpathogeninfectedplantpercentage

allowed)

脱毒种薯繁殖田中真菌病株和其它病株的允许百分率

3.8混杂植株允许率(Maximumoff-typeplantpercentageallowed)

脱毒种薯繁殖田中混杂的其它马铃薯品种植株的允许百分率。

3.9有缺陷薯(Defecttuber)

指畸形、次生、龟裂、虫害、冻伤、黑心和机械损伤的薯块。

3.10隔离栽培(Isolatedplanting)指在与病虫害相对隔离条件下进行的栽培方式。

3.11扩繁栽培(Multiplicationplanting)

主要指lg以上脱毒原原种直接种入大田，采取调节播种期、喷药防虫、剔除病、杂株等综合保护

措施，生产脱毒原种的种植方式。

4脱毒组培苗快繁

4.1脱毒组培苗的培育

4.1.1选材：应选用生产上主栽的、或具有某种特性(如抗马铃薯癌肿病)优良品种块茎的休眠芽或刚出

土幼苗的茎尖、或田间成株上的叶芽作茎尖剥离材料。

4.1.2培养基的制备：在每l000mlMS培养基(见附录A)中加GA30.2mg～0.3mg、6-BA0.1mg～0.2mg、

NAA0.01mg～0.05mg、泛酸钙1.5mg～2.5mg，分装入管(或瓶)。

4.1.3灭菌：在0.15Mpa／cm2压力下灭菌15min～20min，冷却备用。

4.1.4茎尖剥离接种：将入选材料放入纱布袋，用自来水冲洗1h后，在无菌条件下，放入70％～75

％酒精中浸2s～3s，再用0.1％升汞液消毒3min～6min(或用3％次氯酸钠液加2～4滴吐温振荡消

毒15min～20min)，取出用无菌水冲洗3～5次，用灭菌滤纸吸干材料表面水分，在体视解剖镜下用手

术刀等工具轻、准、快速地剥去幼叶，切取带l～2个叶原基(0.1mm～0.4mm大小)的生长点，迅速接

入装有茎尖分化培养基的试管或培养瓶中，每管（瓶）放1个生长点。注明品种，茎尖号，接种期。

4.1.5培养条件：日温25℃，夜温15℃，光照时数l2h／d～14h／d，光照强度2000～30001x条

件下培养。

4.2病毒检测

本单位自检，然后送国家法定植检部门复检认定。

用于检测的数量不低于总数的10%。根据检测结果出具检验结果报告单，如果脱毒苗没有检出

PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS和PSTVd等病毒和类病毒，则应批准进行组培苗生产。不合

格的脱毒苗不得用于组培快繁。

4.2.1检测方法：马铃薯PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS等病毒，用酶联免疫吸附（ELISA）

法检测（见附录B），无阳性反应再用指示植物鉴定。纺锤块茎类病毒(PSTVd)用往复双向聚丙烯酰胺

凝胶电泳法（R）检测（见附录C），鉴定筛选出不带PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM、PVS

和PSTVd的脱毒苗。

4.2.2脱毒苗复检：继代扩繁中选留的脱毒苗，每年至少作一次病毒复检。

4.3脱毒苗组培快繁

4.3.1脱毒组培苗来源：经4.2.1检测，脱除了所列病毒的组培苗。

4.3.2培养基：用MS培养基。灭菌同5.1.3。

4.3.3快繁：将脱毒苗剪切成1cm左右，带一叶一芽的茎段接种于继代培养基上，每瓶培养基接种10～

15个茎段，待茎段长成高10cm左右小苗（培养15d～30d），进行切段转接，如此，反复继代培养繁

殖。

4.3.4培养条件：同4.1.5

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4.4脱毒组培苗的保存

4.4.1培养基：Ms+B95mg/l～10mg/l+甘露醇40mg/l+琼脂7000mg/l+40000mg/l。pH5.8.每瓶装培养

基45ml~70ml，灭菌同4.1.3。

4.4.2接种：选继代培养中生长健壮的组培苗，进行切段，每瓶接种10个茎段。

4.4.3培养：置弱光（1000lx）和较低温度（5℃~10℃）下保存。3～6个月转接一次。3y～4y更

新一次用于快繁的脱毒组培苗。

5原原种生产

用脱毒组培苗或试管薯在60目以上网室内隔离栽培。

5.1隔离网室的建立

5.1.1环境条件：选择四周无高大建筑物，水源、电源、交通便利，通风透光的地方建网室。

5.1.2建设要求：隔离网室用热镀锌钢管作支撑，高3m～3.5m，宽6m～10m。网室内地表及网室四

周2m内，应建成水泥地面，网室周围10m范围内不能有其它可能成为马铃薯病虫害侵染源或可能成

为蚜虫寄主的植物。严防网室内地表积水和网室外水流入。用于隔离的的网纱孔径要达到60～80目。

5.2扦插(或播种)前准备

5.2.1炼苗：将长到7～8片叶，苗龄30d左右的组培苗拔去瓶塞，炼苗2d～3d。

5.2.2基质：蛭石、草炭、珍珠岩或细砂均可作基质。生产原原种以蛭石、珍珠岩混合基质为好，混合

比例2：1，将混合基质装入规格适宜的育苗盘，基质装填前应充分吸水。每茬薯收后基质必须严格蒸

煮消毒，一般反复使用3y～4y。

5.2.3消毒：工作人员进出棚必须更换鞋和工作服，并用肥皂洗净手。扦插（或播种）工具每次使用前

均应蒸煮消毒，不能蒸煮的用肥皂水认真清洗后用75％酒精浸泡消毒。

5.2.4切段：将经炼苗的脱毒试管苗用镊子轻轻取出，用剪刀剪为3cm～4cm长的茎段，供扦插用。

5.2.5剪尖：扦插的脱毒苗高5cm～7cm、直播薯苗高8cm～10cm，侧枝长5cm～6cm时，剪取3cm～

4cm长的主茎顶端或侧枝尖端（每株只剪3～4次），供扦插用。

5.3切段和扦插苗处理

将切段和扦插苗放入20ppmNAA+1‰克露+1‰威力特的混合液中浸泡10min～15min后取出备插。

5.4试管薯播种与剪尖苗扦插

5.4.1选薯：生产原原种用的试管薯，必须是通过休眠、萌芽整齐的薯。

5.4.2密度：生产原原种的组培苗切段扦插株行距为2.5cm×2.5cm；扦插苗为3.3×3.3cm。

5.4.3放盘：将插、播好的育苗盘规范整齐放置于网室，分厢放置，每厢24～30盘，每厢间隔80cm。

5.5管理

5.5.1拱棚盖膜：脱毒苗（或薯）插（播）好后，轻细均匀喷水，使基质充分饱和吸水，及时拱棚盖膜，

小拱棚内相对湿度保持在90％～95％。

5.5.2施肥：从小苗生根成活（插后7d～１０d）及时撤拱棚到收薯前10d，根据苗情喷施0.2％～

0.3％N:P:K＝2:1:3的营养液4～6次，每厢（3.5m2）喷7500ml（出拱棚后喷第一次肥浓度应减半，

每7d～10d喷一次）。

5.5.3浇水：勤浇、细浇、少浇，保持基质湿润，持水量50％～60％，收前7d～10d停止浇水。

5.5.4病虫害防治：防治对象、时期、方法按附录D执行。发现病株连同薯块拔除，带出网室外销毁。

5.6收获、包装．贮存

5.6.1原原种收获：早熟种在插后60d～65d，中早熟种65d～70d，晚熟种在插后75d～80d即

可收获。收获时避免机械损伤和品种混杂。收后摊晾4d～7d，剔除烂薯、病薯，伤薯及杂物。

5.6.2分级标准：按种薯个体重量大小依次分为5g以上、3g～5g、1g～3g三个等级。

5.6.3包装：包装采用尼龙网袋包装，每袋2000粒左右，按等级和收获期分品种装袋，作好标记，双

标签，袋内袋外各一。

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5.6.4贮存方式：根据当地气候，种薯生产量、收期、设备条件及用种季节，将种薯置于常温或低温室

(平摊或上架)内避光贮存。

5.6.5贮存条件：低温贮存5℃～8℃。相对湿度80％～90％。

5.6.6贮存(包装)量：装袋不超过网袋体积的三分之二，平堆厚度为30cm左右。

6原种生产

6.1选地：选择海拔1500m以上的高寒少蚜山区或中低海拔地区自然隔离条件良好(500m内无茄科、

十字花科作物，无商品薯种植)土质疏松、肥力中上、排灌方便两年内未