GB/T 18634-2002 饲用植酸酶活性的测定 分光光度法

GB/T18634-2002

前言

本标准参考美国公职分析化学家协会(AOAC)方法和国外有关文献资料制定。

本标准确定了饲用植酸酶的活性单位定义，采用钒铝显色分光光度法测定植酸酶活性。此项标准分

为绝对法和相对法，对标准物质和试剂的选择均有详细说明。规定了方法的适用范围.检测原理，检测程

序及最佳样品浓度。

本标准的附录A是提示的附录。

本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。

本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(北京)、罗氏泰山(_L海)维生素制品有限公司、巴斯

夫维生素有限公司。

本标准主要起草人:马东霞、苏晓鸥、张苏、王云全、张若寒。

中华人民共和国国家标准

饲用植酸酶活性的测定

分光光度法GB/T18634一2002

Determinationoffeedphytaseactivity

Spectrothotometricmethod

飞范围

本标准规定了以分光光度法测定饲用植酸酶活性的方法。

本标准适用于作饲料添加剂用的植酸酶产品，也适用于添加有植酸酶的配合饲料、浓缩饲料和添加

剂预混合饲料。样品最低检出量为90U/kg,

2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均

为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB/T6682--1992分析实验室用水规格和试验方法(neqISO3696:1987)

3植酸酶活性单位定义

样品在植酸钠浓度为5.0mmol/L,温度37C,pH值5.50的条件下，每分钟从植酸钠中释放

1timol无机磷，即为一个植酸酶活性单位，以U表示。

4方法原理

植酸酶在一定温度和pH条件下，水解底物植酸钠，生成正磷酸和肌醇衍生物，在酸性溶液中，用钒

钥酸钱处理会生成黄色的[(NH,),PO,NH,VO,"16MoO,〕复合物，在波长415nm下进行比色测定。

5试荆和溶液

本标准中所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的三级水。

清洗试验用容器不要用含磷清洗剂。

5.1乙酸缓冲液(I),c(CH,000Na·3H,O)为0.25mol/I:称取34.02g三水乙酸钠，0.1g吐温20

于1000m工容量瓶中，加人900mL水溶解，用盐酸调节pH至5.50士0.01，并用蒸馏水定容至

1000ML,室温下存放2个月有效。

5.2乙酸缓冲液(I),c(CH3000Na"3H,0)为0.25mol/I:称取34.02g三水乙酸钠，5g吐温20,

30g乙二胺四乙酸二钠(EDTA)于1000MI容量瓶中，加人900m工_水溶解，用盐酸调节pH至5.50士

0.01，并用蒸馏水定容至1000mL,室温下存放2个月有效。

5.3植酸钠溶液，c(C6H)〔,P,Na)为7.5mmol/1_:称取0.6929g肌醇六磷酸钠(C,H,O,,P,Na:)于

100m工容量瓶中，用乙酸缓冲液((5.1)溶解并定容至刻度，现用现配(实际反应液中的最终浓度为

5.0mmol/I)。

中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2002-02-19批准2002-07-01实施

Gs/T18634一2002

5.4硝酸溶液:1+2水溶液。

5.5100g/1铝酸按溶液:称取log钥酸t}L(NH,)6Mo,024.4H20习于100m工容量瓶中，加人l.0ml,

氨水(250o)用水溶解定容至刻度

5}62.35g/1钒酸钱溶液:称取0.235g钒酸钱(NH4VO3)于100m工，棕色容量瓶中，加人Zm工J硝酸

溶液(5.4)，用水溶解定容至刻度。避光条件下保存一周有效。

5.7颜色终止液:移取2份硝酸溶液((5.4),1份钥酸钱溶液((5.5),1份钒酸钱溶液(5-6)混合后使用，

现用现配。

5.8植酸酶标准品(标明准确活性单位和类型)。

5.9磷酸二氢钾(KH,PO):基准物。

6仪器和设备

6.1实验室常用仪器设备。

6.2恒温水浴((37士。.1)c.

6.3分光光度计:有10mm比色皿，可在415nm下测定吸光度。

6.4磁力搅拌器。

6.5涡流式混合器。

6.6酸度计:精确至小数点后2位。

6.7离心机:转速为4000r/min以上。

了试样制备

取有代表性样品，用四分法将试样缩分至2。。9，植酸酶产品不需粉碎，配合饲料和添加剂预混合饲

料需粉碎通过0.45mm标准筛，装人密封容器，防止试样成分变化。

8测定步骤

8-1绝对法(仲裁法)

8.1.1标准曲线