DB37/T 2760-2016 鸭甲肝病毒血清1型和3型双重RT-PCR鉴别方法

1ICS11.220

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T2760—2016

鸭甲肝病毒血清1型和3型双重RT-PCR鉴

别方法

DuplexRT-PCRdetectionmethodforduckhepatitisAvirustype1and3

2016-05-13发布2016-06-13实施

山东省质量技术监督局发布

DB37/T2760—2016

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出。

本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。

本标准由山东农业大学负责起草，山东省农科院家禽研究所、山东省畜牧兽医职业学院等参加起草。

本标准主要起草人：姜世金、谢之景、宋敏训、刁有祥、李舫、张瑞华、陈君豪、陈琳琳、沈美艳。

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DB37/T2760—2016

鸭甲肝病毒血清1型和3型双重RT-PCR鉴别方法

1范围

本标准规定了兽医实验室对两种血清型的鸭甲肝病毒（DHAV）即1型鸭甲肝病毒（DHAV-1）和3型鸭

甲肝病毒（DHAV-3）进行双重RT-PCR鉴别的操作规程和技术要求。

本标准适用于鸭甲肝病毒血清1型和3型的快速鉴别诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T554—2002鸭病毒性肝炎诊断技术

SN/T3464—2012鸭病毒性肝炎Ⅰ型检疫技术规范

3实验室条件

3.1仪器

PCR仪、台式低温高速离心机、电泳仪、电泳槽、冰箱、紫外凝胶成像仪、微量移液器和水浴锅等。

3.2操作区域

样品操作区要有相应的生物安全设施；RNA提取区和RT-PCR配液区要求高度洁净。

样品操作区、RNA提取区、PCR扩增区、电泳区应单一方向，不得倒流。电泳区与其他操作区域相互

隔离。

3.3操作者

操作者应接受过实验室生物安全培训、分子生物学实验室检测技术培训。

4试剂的准备

4.1试剂

4.1.1RNA提取试剂盒。

4.1.2一步法RT-PCR试剂盒。

4.1.31%琼脂糖凝胶，见A.1。

4.1.41×TAE缓冲液，见A.2。

4.1.5溴化乙锭（10μg/μL），见A.3。

4.1.6核酸电泳加样缓冲液，A.4。

4.1.7DEPC水，见A.5。

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DB37/T2760—2016

4.1.8DNA分子量标准参照物，要求在100bp～1000bp之间有5条以上的指示条带。

4.1.9用已知的含有与RT-PCR检测引物（附录B）相对应的且灭活的1型鸭甲肝病毒和3型鸭甲肝病

毒制作的阳性对照标准品。

4.1.10用高压灭菌的蒸馏水作为阴性对照标准品。

4.2引物

序列见附录B，浓度均为10μmol/L。

5操作程序

5.1样品的采集和处理

对临