GB/T 21104-2007 动物源性饲料中反刍动物源性成分(牛、羊、鹿)定性检测方法 PCR方法

犐犆犛６５．１２０

犅４６

中华人民共和国国家标准

／—

犌犅犜２１１０４２００７

动物源性饲料中反刍动物源性成分

（牛、羊、鹿）定性检测方法犘犆犚方法

国家标准ㅤ可打印ㅤ可复制ㅤ无水印ㅤ高清原版ㅤ去除空白页

犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犚狌犿犻狀犪狀狋犻犪犱犲狉犻狏犲犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊

（、、）—

犅狅狏犻犱犪犲犆犪狉犻狀犪犲犆犲狉狏狌狊犻狀犪狀犻犿犪犾狅狉犻犻狀犪狋犲犱犳犲犲犱狊狋狌犳犳狊犘犆犚犿犲狋犺狅犱

狆犵

２００７１０２４发布２００８０４０１实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

中国国家标准化管理委员会

／—

犌犅犜２１１０４２００７

前言

本标准的附录为资料性附录。

Ａ

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。

国家标准ㅤ可打印ㅤ可复制ㅤ无水印ㅤ高清原版ㅤ去除空白页

Ⅰ

／—

犌犅犜２１１０４２００７

动物源性饲料中反刍动物源性成分

（牛、羊、鹿）定性检测方法犘犆犚方法

１范围

本标准规定了动物源性饲料中反刍动物（）源性成分（牛、羊、鹿）检测的方法，该检

ＲｕｍｉｎａｎｔｉａＰＣＲ

测方法的检出限为０．１％（质量分数）。

本标准适用于动物源性饲料中反刍动物源性成分（牛、羊、鹿）的定性检测。

２规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

ＧＢ６６８２分析实验室用水规格和试验方法

／饲料采样（／—，：，）

ＧＢＴ１４６９９．１ＧＢＴ１４６９９．１２００５ＩＳＯ６４９７２００２ＩＤＴ

／基因检验实验室技术要求

ＳＮＴ１１９３

３术语和定义

国家标准ㅤ可打印ㅤ可复制ㅤ无水印ㅤ高清原版ㅤ去除空白页

下列术语和定义适用于本标准。

３．１

聚合酶链式反应；

狅犾犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀犘犆犚

狆狔

用于扩增位于两段已知序列之间（，脱氧核糖核酸）的方法。模板

ＤＮＡｄｅｏｘｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅａａｃｉｄ

ｙ

ＤＮＡ经过高温变性成单链，在ＤＮＡ聚合酶和适宜的温度下，两条互不互补的寡核苷酸片段即引物分

别与模板两条链上的一段互补序列发生退火，接着在聚合酶的催化下以种（

ＤＮＡＤＮＡ４ｄＮＴＰｄｅ

ｏｘｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｔｒｉｈｏｓｈａｔｅ，脱氧核苷酸三磷酸）为底物，使退火引物得以延伸，如此反复变性、退火

ｙｐｐ

和合成这一循环，使位于两段已知序列之间的片段呈几何倍数扩增，经个个扩增

ＤＮＡＤＮＡ２５～３０

循环，扩增倍数达到约６。

１０

４原理

利用裂解液破碎细胞，三氯甲烷抽提蛋白质，无水乙醇沉淀得到ＤＮＡ；以提取的ＤＮＡ为模板进行

扩增，琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物；阳性产物应用限制性内切酶酶切反应进行确证。

ＰＣＲＰＣＲＰＣＲ

５试剂和材料

除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水符合ＧＢ６６８２的要求。

５．１反刍动物源性成分检测用引物（对）序列为：

：’’

Ｆ５ＴＴＴＧＧＴＣＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＧＴＴ３

：’’

Ｒ５ＣＴＴＡＧＴＣＡＡＡＣＴＴＴＣＧＴＴＴ３

５．２聚合酶（，，水生栖热菌）。

犜犪ＤＮＡ犜犪犜犺犲狉犿狌狊犪狌犪狋犻犮狌

狇狇狇

５．３限制性内切酶：犃犾狌Ｉ酶。

１

／—

犌犅犜２１１０４２００７