DB21/T 1687-2008 生鲜肉中三聚氰胺的测定

ICS65.120

B46

备案号：DB21

辽宁省地方标准

DB21/T1687—2008

生鲜肉中三聚氰胺的测定

DeterminationofMelamineinFreshMeats

2008-11-19发布2008-12-01实施

辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T1687—2008

前言

本标准由辽宁省动物卫生监督管理局提出并归口。

本标准由辽宁省质量技术监督局发布。

本标准附录A为资料性附录。

本标准负责起草单位：农业部饲料质量及畜产品安全监督检验测试中心（沈阳）。

本标准起草人：王淑芬张建勋刘全刘敬先刘凯杨希国于家丰王丽娜田晓玲曲韵坤。

本标准首次发布。

I

DB21/T1687—2008

生鲜肉中三聚氰胺的测定

1范围

本标准规定了生鲜肉中三聚氰胺残留检测的制样和酶联免疫（ELISA）、高效液相色谱（HPLC）、

气相色谱-质谱法(GC-MS)测定方法。

本标准适用于生鲜猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉中三聚氰胺残留检测。

本标准中的酶联免疫法为筛选方法，筛选结果为阳性的样品需要用仲裁法确证，高效液相色谱法和

气相色谱-质谱法为定量方法，其中气相色谱-质谱法为仲裁法。酶联免疫法定量限为0.20mg/kg，高效

液相色谱法定量限为0.20mg/kg，气相色谱-质谱法定量限为0.10mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修

改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是

否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法

3制样

3.1试样的制备

从原始样品中分取出约500g，经绞肉机绞碎、匀质使均匀。

3.2试样的保存

-20℃以下贮存。

4酶联免疫法

4.1原理

本方法基于酶联免疫法中的竞争性测定法原理，通过样品萃取物中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物

竞争结合微孔中的三聚氰胺抗体，除去未结合的三聚氰胺酶标记物后，结合的酶标记物将无色的底物转

化为蓝色的物质，加终止液后在450nm下读取各微孔吸光度值。吸光度值与样品中的三聚氰胺含量成反

比。

4.2试剂和溶液

4.2.1除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯。水应符合GB/T6682二级水的规定。

4.2.2三聚氰胺试剂盒（附系列标准品溶液，酶标记物，清洗液、底物，终止液，说明书）。

4.2.3异辛烷（C8H18）

4.2.4三氯甲烷（CHCl3）

4.2.5异辛烷+三氯甲烷混合液：准确量取40ml异辛烷（4.2.3）和60ml三氯甲烷(4.2.4),混匀即得。

4.2.610%甲醇/20mMPBS：称取0.62gNaH2PO4·H2O，5.73gNa2HPO4·12H2O和9gNaCl用蒸馏水溶解，并

定容至1000mL，取此溶液900mL，加入100mL甲醇混匀即得。

4.3仪器和设备

4.3.1酶标仪（带450nm滤光片）。

4.3.2涡旋混合器。

1

DB21/T1687—2008

4.3.3冷冻离心机。

4.3.4微量加样器：20µL、50µL、100µL、150µL、250µL。

4.3.5恒温干燥箱。

4.3.6分析天平：感量0.01g。

4.3.7振荡器

4.3.8绞肉机

4.3.9匀浆机

4.4测定步骤

4.4.1样品处理

准确称量2g试料（3.1）精确到0.01g，加入10mL10%甲醇/20mMPBS（4.2.6），涡旋30s，振荡5min，

4000r/min离心5min，取2mL上清液加入2mL异辛烷+三氯甲烷混合液（4.2.5），混匀，4000r/min离心5min，

静置，取上层150µL待测。

4.4.2测试程序

取出欲测数量的微孔条安插在酶标板上，分别吸取0µg/L、20µg/L、100µg/L、250µg/L、500µg/L

标准溶液（4.2.2）和试样萃取液（4.4.1）各150µL至包被有三聚氰胺抗体的对应微孔中，分别加入50µL

三聚氰胺酶标记物溶液，振荡使混匀，25℃左右孵育30min。倾尽酶标板，清洗液（4.2.2）洗板4次，

拍干。加100µL底物（4.2.2）至每个微孔中，振荡使混匀，25℃左右孵育30min。加100µL终止液（4.2.2）

至每个微孔中，振荡混匀，450nm下读取各微孔吸光度值。

注：不同品牌的试剂盒其操作步骤可能略有差异，比如稀释倍数，具体操作步骤可根据试剂盒使用说明书略作调整。

试剂盒使用前恢复到室温。

标准和样品做平行试验以增加准确性。

4.5结果计算

以空白溶液（浓度为0的标准溶液）的吸光度值为100%作为计算基准，折算出各标准溶液和试样萃

取液的相对吸光度值。

标准吸光度值（或试样萃取液吸光度值）

相对吸光度值（%）=×100………（1）

空白吸光度值

绘制标准相对吸光度值与浓度（µg/L）关系曲线，校正曲线在20µg/L-500µg/L范围内为线性。试样

萃取液的浓度（µg/L）可以从校正曲线上读出。

5高效液相色谱法

5.1原理

试料中的三聚氰胺经三氯乙酸和乙酸铅提取并沉淀蛋白、三氯甲烷去除脂溶性杂质，混合型阳离子

交换固相萃取小柱净化，高效液相色谱仪测定，外标法定量。

5.2试剂和材料

除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯。除色谱用水应符合GB/T6682一级水的规定外，水应

符合GB/T6682二级水的规