GB/T 32268-2015 十八烷基键合相(C18)高效液相色谱柱性能测定方法

ICS71.040

N04w

中华人民共和国国彖标淮

GB/T32268—2015

十八烷基键合相(C18)高效液相色谱柱

性能测定方法

Methodofperformancetestingforoctadecylbonded(C18)highperformance

liquidchromatography(HPLC)column

2015-12-10发布2016-07-01实施

幅畿勰畫曹1警彎畫发布

GB/T32268—2015

—1—

刖旨

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由中华人民共和国科学技术部提出。

本标准由全国仪器分析测试标准化技术委员会(SAC/TC481)归口。

本标准负责起草单位:天津博纳艾杰尔科技有限公司。

本标准参加起草单位：中国分析测试协会、北京大学、中国科学院化学研究所、中国计量科学研究

院、中国食品药品检定研究院、北京有色金属研究总院、沃特世科技(上海)有限公司、大连依利特分析仪

器有限公司、北京金欧亚科技发展有限公司。

本标准主要起草人：王宛、汪群杰、赵羽、张学、张庆合、刘国铃、刘虎威、胡昌勤、汪正范、蔡会霞、

汪若梅。

GB/T32268—2015

十八烷基键合相（C18）高效液相色谱柱

性能测定方法

1范围

本标准规定了十八烷基键合相高效液相色谱柱（简称“C18HPLC柱”）性能的测定方法。

本标准适用于C18HPLC柱性能的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T9008液相色谱法术语柱色谱法和平面色谱法

GB/T32267分析仪器性能测定术语

JJG705液相色谱仪检定规程

3术语和定义

GB/T9008和GB/T32267界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1

十八烷基键合相（C18）高效液相色谱柱octadecylbondedhighperformanceliquidchromatography

column

装有键合十八烷基的固定相的高效液相色谱柱。

3.2

柱内径columninternaldiameter

色谱柱柱管的内径。

3.3

疏水保留因子retentionfactorofhydrophobicity

On

表征C18固定相的Cl8烷基链的相对数量的参数，与填料颗粒的比表面积和表面碳覆盖率有关。

3.4

疏水选择性因子selectivityfactorofhydrophobicity

«hP

表征C18固定相对被分离物质分子疏水基团的选择识别能力的参数，与填料颗粒的表面碳覆盖率

有关。

3.5

立体选择性因子stericselectivityfactor

ass

表征C18固定相对被分离物质分子形状的选择识别能力的参数，与填料颗粒表面的官能团键合度

1

GB/T32268—2015

和碳覆盖率有关.

3.6

氢键容量因子hydrogenbondingcapacityfactor

an

表征C18固定相的氢键作用的参数，与纯水中填料颗粒表面残留的游离硅羟基数量有关。

3.7

总离子交换容量因子totalionexchangecapacityfactor

表征C18固定相在pH7.60的流动相中离子交换能力的参数，与填料颗粒表面的硅疑基数量及其

他离子交换位点的数量有关。

3.8

酸性环境中离子交换容量因子ionexchangecapacityfactorinacidicsolution

a

表征C18固定相在pH2.60的流动相中离子交换能力的参数，与在pH2.60时填料颗粒表面的离

子交换位点的数量有关。

3.9

金属活性因子metalactivityfactor

gm

表征C18固定相表面杂质金属的含量及配位能力的参数。

3.10

酸性化合物选择性因子selectivityfactorforacidiccompound

Qs

表征C18固定相对酸性化合物和中性化合物的分离能力的参数。在实际测定中，其下标中可标示

出具体测定物质的名称，如as苯酚。

3.11

碱性化合物选择性因子selectivityfactorforbasiccompound

Qsb

表征C18固定相对碱性化合物和中性化合物的分离能力的参数。在实际测定中，其下标中可标示

出具体测定物质的名称，如as阿*智林。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂的级别应不低于分析纯级,水的级别符合GB/T6682一级水的规定。

4.1甲醇(CFLOH)：色谱纯。

4.2乙ffi(CH:1CN)：色谱纯。

4.3磷酸二氢钾(KH2P()4)O

4.4磷酸(H3PO4)o

4.5氢氧化钠(Na()H)o

4.6氢氧化钾(K()H)0

4.7三氟乙酸(CF3COOH)o

4.8三乙胺(C6H15N)O

4.9尿喀睫(GH4N2O2)。

4.10正丁基苯(CI0H14)o

2

GB/T32268—2015

4.11正戊基苯(CnH16)o

4.12邻三联苯(C18H14)o

4.13苯并菲(C18H12)O

4.14咖啡因(CfiH10N4O2)o

4.15苯酚(C6H5OH)o

4.16苯胺(C6H5NH2)O

4.172,3-二轻基蔡(C10H8O2)o

4.182,7-二瓮基蔡(C10H8O2)o

4.19阿米替林(C20H23N)o

4.20尿#(C9H12N206)o

4.21氢氧化钠调节液

称取4.00g氢氧化钠，溶于10.0mL水中。

4.22氢氧化钾调节液

称取5.60g氢氧化钾，溶于10.0mL水中。

4.23磷酸盐缓冲液(pH2.60)

称取1.36g磷酸二氢钾，置于合适的烧杯中，溶解于480.0mL水，用浓磷酸调节pH值至2.60,然

后转移并定容于500.0mL的容量瓶中，得到pH2.60的磷酸二氢钾缓冲液。

4.24磷酸盐缓冲液(pH5.80)

称取1.36g磷酸二氢钾，置于合适的烧杯中，溶解于480.0mL水，用氢氧化钾调节液(4.22)调节

pH值至5.80,然后转移并定容于500.0mb的容量瓶中，得到pH5.80的磷酸二氢钾缓冲液。

4.25磷酸盐缓冲液(pH7.60)

称取1.36g磷酸二氢钾，置于合适的烧杯中，溶解于480.0mL水，用氢氧化钾调节液(4.22)调节

pH值至7.60,然后转移并定容于500.0mL的容量瓶中，得到pH7.60的磷酸二氢钾缓冲液。

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪

高效液相色谱仪应符合JJG705的规定，并满足以下各项要求：

a)检测器

高效液相色谱仪配备紫外-可见光检测器，其波长范围覆盖190nm〜400nm即可。流通池和

采集频率的设定办法为：

1)当测试普通液相色谱柱时，检测器的流通池体积不大于15卩L,采集频率不小于10Hz。

2)当测试超高效液相色谱柱时，检测器的流通池体积不大于5ptL,采集频率不小于20Hz。

注：超高效液相色谱柱指装填有基于＜2硅胶基质或业3“m核壳式硅胶基质的固定相的液相色谱柱。此处所

述硅胶基质包括碳杂化硅胶基质。

b)柱温箱

高效液相色谱仪需配备柱温箱，其温度设定值最大允许误差为±2°C,温度稳定性为不大于

1°C/h。

C)连接管线

色谱柱需要通过材质为PEEK或者不锈钢的连接管线连接到进样器和检测器之间。色谱柱

和进样器或者检测器之间的连接管线的长度均不超过25cm。连接管线的内径尺寸根据色谱

柱的内径尺寸进行选择：

1)当色谱柱的柱内径小于2.1mm时，连接管线的内径为0.13mmo

3

GB/T32268—2015

2）当色谱柱的柱内径大于或等于2.1mm且小于或等于4.6mm时，连接管线的内径为

0.18mmo

3）当色谱柱的柱内径大于4.6mm且小于21.2mm时，连接管线的内径为0.25mm0

4）当色谱柱的柱内径大于或等于21.2mm时，连接管线的内径为0.5mmo

5.2分析天平

准确度级别为I级，实际标尺分度值0.1mg0

5.3移液器

量程分別为0.1mL〜1.0mL和1.0mL〜10.0mLo

5.4量筒

规格为500.0mLo

5.5容量瓶

规格分别为10.0mL、100.0mL和500.0mL0

5.6pH计

精度为0.01o

6条件

6.1仪器工作条件

6.1.1环境温度：15°C~30°C。

6.1.2相对湿度：20%〜80%。

6.1.3供电电源：交流220V+22V,频率50Hz±0.5Hz。

6.1.4室内应清洁无尘,具有良好的通风装置，无易燃、易爆和腐蚀性气体。

6.1.5仪器应平稳地放在T作台上，周围无影响仪器使用的振动和电磁干扰，仪器接地良好。

6.2试验准备条件

6.2.1试验用计量仪器、仪表和玻璃器皿均应按有关规定，经计量检定单位检定合格并满足量程和精

度的要求。

6.2.2在试验前将满足5.1要求的高效液相色谱仪调整至正常工作状态，按照各项性能指标测定所需

的液相色谱条