DB34/T 2813-2017 梨炭疽病菌检疫鉴定方法

ICS

65.020.20

B16

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2813—2017

梨炭疽病菌检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofColletotrichumgloeosporioidesPenz．

文稿版次选择

2017-03-30发布2017-04-30实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2813—2017

前

言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。

本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。

本标准主要起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、安徽省农科院植物保护与农产品质量安全

研究所。

本标准主要起草人：李云飞、陈雪娇、宗凯、杨雪、孙娟娟、郑海松、姚剑、陈雨、余晓峰、王满

满。

I

DB34/T2813—2017

梨炭疽病菌检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了梨炭疽病菌的检疫鉴定方法。

本标准适用于果实、苗木及其制品中梨炭疽病菌的检疫和鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3梨炭疽病菌基本信息

学名：ColletotrichumgloeosporioidesPenz.

分类地位：真菌界（Fungi），黑盘孢目（Melanconiales）,黑盘孢科（Melanconiaceae），炭疽

菌属（Colletotrichum），其有性阶段为围小丛壳（Glomerellacingulata）。

传播途径：梨炭疽病主要借助雨水、昆虫等进行近距离传播，借助果实、苗木及其制品等的调运进

行远距离传播。

4方法原理

根据梨炭疽病菌在寄主上的为害症状（参见附录A），培养基上生长的菌落、菌丝、分生孢子和分

生孢子器等形态特征，以及PCR特异扩增片段大小进行结果判定。

5仪器设备和主要试剂

5.1仪器设备

生物显微镜、体视显微镜、高速冷冻离心机、纯水仪、超净工作台、灭菌锅、制冰机、PCR仪、凝

胶成像系统、电泳仪、培养箱、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器。

5.2主要试剂

5.2.1除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB/T6682的规定。

5.2.21％次氯酸钠。

5.2.3DNA提取试剂：DNA提取试剂盒，CTAB裂解液（20g/LCTAB，0.1mol/LTris，1.4mol/LNacl，

20mmol/LEDTA-Na2），蛋白酶K（20mg/mL），苯酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)，3mol/LNaAc(pH

5.2)，异丙醇，70％乙醇，无菌水。

5.2.4PCR试剂：10×PCRbuffer（含25mmol/LMgCl2），Taq酶，dNTP。

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5.2.5凝胶电泳试剂：琼脂糖，TAE，LoadingBuffer，EB。

马铃薯葡萄糖琼脂培