DB37/T 4436-2021 禽白血病病毒与禽网状内皮组织增殖病病毒联合净化技术规程

ICS11.220

CCSB41

37

山东省地方标准

DB37/T4436—2021

禽白血病病毒与禽网状内皮组织增殖病病

毒联合净化技术规程

Technicalregulationsforeliminationofavianleukosisvirusandreticuloendotheliosis

virus

2021-11-17发布2021-12-17实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T4436—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。

本文件由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：山东省动物疫病预防与控制中心、山东农业大学、山东益生种畜禽股份有限公司。

本文件主要起草人：胡莉萍、成子强、薛婧雯、周德方、陈静、江芳、张心悦。

I

DB37/T4436—2021

禽白血病病毒与禽网状内皮组织增殖病病毒联合净化技术规程

1范围

本文件规定了禽白血病病毒和禽网状内皮组织增殖病病毒的实验室检测技术要求和联合净化程序。

实验室检测包括抗原的ELISA检测、RT-PCR检测和病毒分离鉴定。

本文件适用于原种鸡群、祖代鸡群和父母代种鸡群的净化。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4禽白血病病毒与禽网状内皮增殖病病毒实验室检测技术

4.1器材

高温高压灭菌锅(温度范围：105℃～134℃；额定压力：0.23Mpa)、离心机（转速：2000rpm～

14000rpm）、PCR仪、二氧化碳恒温细胞培养箱、分光光度计、酶标仪、冰箱。

4.2材料与试剂

4.2.1无RNase水。

4.2.2商品化的ALV与REVELISA抗原检测试剂盒。ALV和REVELISA抗原检测试剂盒均通过检测泄殖

腔拭子，分别检测ALV所有亚群共有的抗原p27蛋白，或REV的主要免疫原性蛋白p30，从而对ALV和

REV的感染情况进行判定。

4.2.3商品化的RNA提取试剂盒。

4.2.4商品化的RNA反转录试剂盒。

4.2.5PBS缓冲液：NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO41.42g（Na2HPO4·12H2O3.58g），KH2P040.27g

溶于蒸馏水，定容为1000mL，过滤后高温高压灭菌备用。

4.2.6细胞生长培养基：商品化的DMEM液，加10%胎牛血清，青霉素、链霉素各250IU/mL，储存于

4℃冰箱备用。

4.2.7细胞维持培养基：配制方法同4.2.6，使用胎牛血清浓度为1%。

4.2.8ALV-Agp85、ALV-Bgp85、ALV-Jgp85及REVgp90基因片段的特异性引物，具体引物序列见

附录A。

4.2.9除特别规定外，在检测中使用的试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682的要求。

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DB37/T4436—2021

4.3样品

4.3.1血液样品：母鸡翅下静脉抽取1mL静脉血，制备血清；公鸡抽取1mL静脉血，2000rpm离心，

制备血浆，储存于-20℃冰箱备用。

4.3.2泄殖腔棉拭子样品：用无菌棉签插入泄殖腔内，擦拭后将棉签放入装有1mLPBS缓冲液的离心

管内，12000rpm离心2min后将上清等分为2份，将进行抗原检测的样品储存于-20℃冰箱备用，将

进行病毒分离及RNA提取的样品储存于-80℃冰箱备用。检测样品前，棉拭子应反复冻融2次～3次，4℃，

12000rpm离心2min～3min，吸取上清。血清样品于室温融化，500倍稀释，用于检测。

4.3.3蛋清样品：将蛋壳灭菌后，用镊子将种蛋钝端敲破，使用移液器从破壳处沿蛋壳内壁伸入蛋内