NY/T 557-2002 马鼻疽诊断技术

11.220

BIC4S1

中华人民共和国农业行业标准

NY/T557-2002

马鼻疽诊断技术

Diagnostictechniquesforglanders

2002一08一27发布2002一12一01实施

中华人民共和国农业部发布

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NY/'r557-2002

刚台

马鼻疽(妙anders)是马、骡、驴等单蹄动物的一种高度接触性的传染病，被世界动物卫生组织

[WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeInternationaldesEpizooties(法),OIE]列为B类疾

病，我国农业部把该病列为二类动物疫病。本病以在鼻腔、喉头、气管猫膜或皮肤上形成鼻疽结节、溃疡

和瘫痕，在肺、淋巴结或其他实质器官发生鼻疽性结节为特征。

本病的病原为假单胞菌属(Pseudomonas)的鼻疽杆菌(Pseudomonasmallei)a

本标准的附录A为规范性附录。

本标准由农业部畜牧兽医局提出。

本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位:中国人民解放军军需大学。

本标准主要起草人:王世若、王兴龙、韩文瑜、梁焕春、沈广。

NY/T5572002

马鼻疽诊断技术

1范围

本标准规定了鼻疽菌素变态反应试验(含点眼试验皮内注射试验及皮下注射试验)，临床检查及补

体结合反应的检验方法的技术要求。

本标准适用于马、骡、驴等马属动物产地、集散地、饲养、管理、使用单位(含个体)及国境口岸等地的

鼻疽检疫。

2临床症状

感染鼻疽伯克霍尔德菌的马、骡、驴及驴骡(统称马)，包括急性鼻疽马、慢性鼻疽马(又称鼻疽菌素

阳性马)和开放性鼻疽马。

2门急性真疽马

鼻疽菌素点眼试验阳性反应(或提纯鼻疽菌素皮内或皮下注射试验阳性反应)及补体结合反应阳性

反应。

2.2慢性异疽马

病程较长，可持续数月、数年，甚至十多年，病变仅限于内脏，临床症状不明显，或无症状。鼻疽菌素

点眼试验阳性反应。

2.3开放性异疽马

病马鼻粘膜、肺脏或皮肤等处发生典型鼻疽病变，并向外界排带菌的脓性排泄物或脓性分泌物

3异疽菌素点眼试验

11点眼准备

马每次检疫时，点眼2-3次。骡、驴及驴骡每次检疫应点眼3次。点眼试验应于早晨进行，点眼后，

于第3h,6h,9h,24h各检查一次反应强度，而且在第6h和第24h应翻眼检查。

3.2异疽菌素点眼试验操作

3.2.1器材及药品

3.2.，.1器材:点眼管、煮沸消毒器、脸盆、消毒盘、镊子、工作服、口罩、线手套、记录表格、耳夹子等。

3.2.1.2药品:鼻疽菌素(如用提纯鼻疽菌素须用生理盐水稀释，使每毫升含0.5mg),2写.400硼酸

棉球、75%酒精棉球、3%来苏儿、0.1%新洁尔灭、。，1%洗必泰、脱脂棉、纱布等。

3.2.2葺疽菌索点眼试验操作方法

3.2-2.1点眼前，须详细检查两眼结膜，以及是否单、双眼瞎，眼结膜正常者，方可点眼，以另一只眼作

对照，并做记录。

3.2-2.2点眼时，助手保定马，检查者用左手食指插人上眼睑窝内，使瞬膜露出，以拇指拨开下眼睑，使

瞬膜与下眼睑构成凹兜。右手持吸了鼻疽菌素的点眼管，保持水平，手掌下缘支撑额骨之眶部，点眼管尖

端距凹兜约Icm，拇指按压点眼管的胶皮乳头，滴人凹兜鼻疽菌素3-4滴(约。.2mL^0.3ml)。注意

避免点眼管与眼结膜接触。

3-2-2-3每回点眼应点于同一眼中，一般应点于左眼，如左眼有疾患，亦可点于右眼，但须在记录r注

明

NY/T557-2002

3.2.2.4点眼后，注意拴系，并防止风沙侵人和阳光直射，以及磨擦已被点眼的眼睛。

3.3反应强度判定标准

反应强度判定标准如下:

a)强阳性反应(+++):眼睑炎症反应特别明显，上下眼睑互相胶着一起，出现大量脓汁。

b)阳性反应(++);眼睑浮肿，眼睛呈半开状态，出现中等量的脓性眼哆。

e)弱阳性反应(+):眼结膜发炎，浮肿明显，并含有少量的脓性眼哆，或在灰白色粘液眼哆中混有

脓性眼哆.

d)疑似反应(士):眼结膜潮红，有弥漫性浮肿和灰白色猫液性(非脓性)眼哆。

e)阴性反应(一):眼结膜没有反应，或眼结膜轻微充血和流泪。

3.4点眼试验结果判定

呈现“+++”、“++”、“+”均判定为阳性反应。“士”和“一”者，经过5d^-6d后要进行第二次点

眼，如仍呈“士”、“+”或以上反应者，均判为阳性反应。“一”者虽判为阴性反应，但间隔5d^-6d后，对

“一”者要进行第三次点眼，如仍呈“一”者判定为阴性反应，呈“士”、“+”或以上反应者则判定为阳性反

应。最后结果的判定，应以连续两次或三次点眼中任何一次的最高反应为准。

4且疽临床检查

4门操作

4门门器材及消毒药

4.1-1.，器材:工作服、胶手套、线手套、防护面具、口罩、风镜、反光镜、手电筒、煮沸消毒器、脸盆、耳夹

子、记录表格等。

4.1.1.2消毒药:。.1%升汞水、3%来苏儿、。.1%新洁尔灭、75%酒精棉球等。

4.1.2检查方法

4门2门检查者及助手均须穿全套工作服，带好胶手套及线手套、口罩、风镜及防护面具，然后在马旁

侧，选择适当位置，对妥为保定后的马进行检查。

4.1.2.2按要求，逐项检查马的鼻腔、皮肤、领下淋巴结及肇丸等。注意观察是否有结节、溃疡、鼻漏、皮

下浮肿、须下淋巴结肿胀、皋丸炎及咳嗽、异常消瘦等症状。

4门.2.3检查鼻腔时，先以消毒药水(如3%来苏儿)洗净鼻腔内外的鼻漏，然后以双手打开鼻孔，用反

光镜或手电筒将光线射人鼻腔深部，仔细检查砧膜上有无鼻疽特有的病变(见4.2.1),

4.1.24检查结束，检查者及助手的手需用0.1%升汞水或3%来苏儿或0.1%新沽尔灭或75酒精

棉球彻底消毒，工作服及用过的器材分别用3%来苏儿等浸泡1h,或煮沸10min消毒。检疫现场用

10%石灰乳、2%热火碱水、10%-20%漂白粉消毒。

4.2耳疽的主要临床症状

4.2.1鼻腔有脓性鼻漏，呼吸带哮鸣音;鼻中隔有大小不等的灰白色鼻疽性结节，周围有红晕，或有大

小不等深浅不一边缘隆起的溃疡;或发生溃疡已愈者，见到星芒状、冰花状的旅痕。皮肤有结节，进而形

成深陷的火山口状溃疡，排出灰黄色或混有血液的猫稠脓汁，溃疡底面似猪油状，结节和溃疡附近的淋

巴管肿大、硬固，粗如绳索(索状肿)，沿索状肿可发现串珠状结节和溃疡。上述症状为典型的鼻疽临床症

状，这种马不进行鼻疽菌素点眼试验，即可定性，此均判定为开放性弃疽马。

4.2.2鼻腔有鼻漏、领下淋巴结肿胀、皮下浮肿、咳嗽、皋丸炎、消瘦等疑似鼻疽症状者，除其中确有大

量脓性鼻漏，马体异常消瘦，同时鼻疽菌素点眼试验呈现阳性反应者，判为开放性鼻疽马外，其他如鼻疽

菌素点眼试验和补体结合反应均呈阳性反应者，判定为急性鼻疽马。

NY/T557-2002

5异疽补体结合反应

5.1材料准备

5.1.1被检血清的采取及处理

被检血清的采取及处理见附录A(规范性附录)。

5.1.2各种要素的配制及效价测定

5.1.2.1各种要素的配制

5.1.2.1.1生理盐水:100mL蒸馏水中加人。.85g抓化钠(化学纯)，充分搅匀后，用滤纸过滤经

107kPa15min灭菌后使用。

5.1.2.1.2绵羊红细胞悬液:

绵羊脱纤血的制备:采健康绵羊颈静脉血至装有玻璃珠的灭菌脱纤瓶内，振荡15min-20min，脱

去纤维蛋白，使其失去凝固性，即为脱纤血。

绵羊红细胞泥的制备:将脱纤血用两层纱布滤过后，移人离心管内，加2倍一3倍量的生理盐水，混

匀，以2000r/min离心沉淀10min后，吸去上清液，再加生理盐水，用玻璃捧搅匀，再离心沉淀，如此反

复三次(第一次除外)，直到上清液透明为止，然后吸去上清液，所剩沉淀，即为红细胞泥(压积红细胞)。

绵羊红细胞悬液的配制及检定:用生理盐水将红细胞泥配成2.5%的浓度，即为试验用的红细胞悬

液。应用前须进行检定，看其浓度是否适当。其方法是，取2ml生理盐水放人反应管中，然后加人2.500

红细胞悬液0.5ml，混匀后，如呈现微红色即为合格，倘若色淡，需酌量补加红细胞泥予以校正(必要时

应计算红细胞数，以每立方毫米中含50万个左右为度)。

5.1.2.1.3溶血素。

5.1.2.1.4补体:可用冻干补体。也可应用豚鼠的新鲜血清作补体，新鲜补体须在实施反应的前一天，

自3只以上健康豚鼠心脏采血，根据体重不同，每头采血5mL-8mL左右。将采集的血液置培养皿中

凝固(每个约盛15mL为宜)，随后，用玻璃棒划破血凝块，放37℃水浴箱中15min后再放于冰箱中过

夜，次日吸取血清，离心沉淀后，其上清即为补体，新采集的补体只能当天使用，置于40C-8C冰箱，可

使用2d;如置一20C一一25℃冰箱冷冻保存，可供一个月使用。

5.1-2-1.5标准血清:鼻疽阴、阳性血清。

5.1.2.1.6鼻疽抗原。

5.1.2.2各种要素的效价的测定

5.1.2.2.1溶血紊效价侧定(通常一个月左右测定一次)

5.1.2.2.1.1稀释溶血素:先将溶血素稀释成1100的基础液(如溶血素以石炭酸防腐时，则取

0.1mL加9.9mL生理盐水，如为甘油防腐，则取。.2mL加9.8mL生理盐水，混合即成)，再按表1进

一步稀释。