NY/T 575-2002 牛传染性鼻气管炎诊断技术

11.220

sIC4S1

中华人民共和国农业行业标准

NY/T575-2002

牛传染性鼻气管炎诊断技术

Diagnostictechniquesforinfectiousbovinerhinotracheitis

2002一08一27发布2002一12一01实施

中华人民共和国农业部发布

气7勺

NY/T575-2002

月U舀

牛传染性鼻气管炎(infectiousbovinerhinotracheitis.简称IBx)是II)牛地痊病毒I型(BHV-I)感

染家养牛和野生牛引起的一种病毒性传染病，被世界动物卫生组织'WorldOrganizationforAnimal

Health(英).OfficeInternationaldesEpizooties(法),OIE〕列为B类疾病.我国农业部列为二类动物疫

病该病广泛分布于世界各地，该病死亡率较低，许多感染牛呈亚临床症状经过往往由于细菌继发感染

导致更为严重的呼吸道疾病。本标准所规定的技术与OIE推荐的相应技术一致

本标准的附录A、附录B为规范性附录。

本标准由农业部畜牧兽医局提出。

本标准由个国动物检疫标准化技术委员会归no

本标准起草单位:农业部动物检疫所。

本标准主要起草人;封启民、李昌琳、李晓成、李其平。

NY/r575--2002

牛传染性鼻气管炎诊断技术

范围

本标准规定了牛传染性鼻气管炎Q(BR)诊断技术要求。

本标准规定的病毒分离方法适用于牛传染性鼻气管炎病毒的分离;微量血清中和试验和酶联免疫

吸附试验适用于牛群检疫、流行病学调查及牛群抗体水平的检测。

2牛传染性鼻气管炎病毒分离鉴定

2门材料准备

2门门病料的采集

2.1.1.1呼吸道拭子:用灭菌拭子伸人鼻道采取分泌物，然后放人含青霉素1000IU/ml，链霉素

」000dig/mL,,1H7.2的Earles液中。也可用棉拭子刮取眼分泌物，并用相同的方法处理。

2.1.1.2阴道拭子:用棉拭子采集脓疙性外阴阴道炎早期病变的阴道私液，放人含青霉素

1000IU/mL,链霉素1000pg/mL,pH7.2的Earles液中

2.1.1.3脑组织样品:在剖检时无菌采集脑组织

2.1.1.4流产胎儿组织样品刚死亡的胎儿，无菌采集肺、’肾、脾等各种组织样品，放人每1.0mL含有

1000IUr,霉素,1000pg链霉素,pH7.2的Earles液中。

2.1.1.5精液:至少采集新鲜精液，或冷冻精液。sm工，置液氮中保存备用

212样品的运送

采集的样品立即放人4(、冰箱保存，在24h内送到实验室

2门.3样品处理

2.1.31收到棉拭子样品后，先经冻融两次，并充分振动，拧干棉拭子，将样品液经10000r/min离心

10min，取上清液作为组织培养的接种分离材料

2.1.3.2组织样品先用Earles液或Hank、液(pH7.2)制成20%的匀浆悬浮液，再经10000r/min离

心10min，取上清液作为接种分离材料

2.1.33精液冻融两次或超声波裂解，再经10000r/min离心10min，新鲜精液通常对细胞有毒性，

在接种前应预先作稀释处理，用Earles液作1，15稀释。

2.2操作方法

样品接种:取经处理过的样品。.2ml接种到已形成良好单层的牛肾或肇丸原代或次代细胞培养

瓶中甸份样品接种4瓶，于37C吸附1h后，倾去接种液，用Earl。液洗三次，最后加人含3%(不含

MR抗体)的犊牛血清细胞维持液lm工一。置37C培养，逐日观察细胞病变;若7天仍不出现致细胞病变，

则收获培养物继代于新制备的细胞上、盲传三代后，观察细胞病变，出现病变者收获培养物，保存于

一7。、〔待鉴定。

2.3病毒鉴定

病毒致