DB45/T 2353-2021 猪主要病毒性腹泻鉴别检测 多重反转录聚合酶链反应法

ICS11.220

CCSB441

45

广西壮壮族族自自治区地方标准标准

DBB45/T23553—2021

猪主主要病毒性性腹泻泻病毒毒鉴别别检测测多多重反

转转录聚聚合酶酶链反应法

Diffferentialdetecttionofmmajorporcineviraldiarrrheaviruses—A

muultiplexRT-PCR

2021--07-27发布2021-008-31实施

广西壮壮族自治区区市场监督督管理局发布布

DB45/T2353DB45/T—2021

目次

前言.................................................................................II.................................................................................前言

1范围...............................................................................1...............................................................................范围1

2规范性引用文件.....................................................................1.....................................................................规范性引用文件2

3术语和定义.........................................................................1.........................................................................术语和定义3

4缩略语.............................................................................2.............................................................................缩略语4

5材料准备...........................................................................2...........................................................................材料准备5

6操作方法...........................................................................3...........................................................................操作方法6

6.1操作环境.......................................................................3.......................................................................操作环境6.1

6.2待检样品处理...................................................................3...................................................................待检样品处理6.2

6.3待检样品总RNA提取............................................................3............................................................提取RNA待检样品总6.3

6.4RT6.4反应3.........................................................................

6.5PCR6.5扩增3........................................................................

6.6阴性及阳性对照.................................................................4.................................................................阴性及阳性对照6.6

6.7扩增产物电泳检测...............................................................4...............................................................扩增产物电泳检测6.7

7结果判定...........................................................................4...........................................................................结果判定7

附录引物序列、扩增片段及结果判定A（规范性）6.........................................

附录重组质粒标准品制备B（规范性）8...................................................

I

DB45/T2353DB45/T—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1.1—2020《标准化工作导则本文件按照GB/T

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出并宣贯。

本文件由广西畜牧业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：广西壮族自治区动物疫病预防控制中心。

本文件起草人：施开创、冯淑萍、尹彦文、陈芳芳、粟艳琼、屈素洁、陆文俊、莫胜兰、李军。

II

DB45/T2353DB45/T—2021

多重反转录聚合酶链反应法多重反转录聚合酶链反应法猪主要病毒性腹泻病毒鉴别检测

11范围

本文件规定了采用多重反转录聚合酶链反应法鉴别检测猪主要病毒性腹泻病毒的材料准备、操作方

法、结果判定等要求。

本文件适用于广西行政区域内猪主要病毒性腹泻病毒的鉴别检测。

22规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

33术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.13.1

猪主要病毒性腹泻swinemainviraldiarrheadiarrheaviralmainswine猪主要病毒性腹泻

由病毒引起的急性消化道传染病，以厌食、呕吐、腹泻、脱水为主要特征，其主要病原有猪流行性

腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪德尔塔冠状病毒。

3.23.2

猪冠状病毒porcinecoronaviruscoronavirusporcine猪冠状病毒

为有囊膜的单股正链RNA病毒，主要包括猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）

以及猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）。以及猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）。

3.33.3

猪轮状病毒porcinerotavirus，PoRVrotavirus，PoRVporcine猪轮状病毒

段RNA病毒。属于呼肠孤病毒科轮状病毒属成员，为双股多节段RNA病毒。

3.43.4

反转录reversetranscription，RTtranscription，RTreverse反转录

模板以RNA为合成互补脱氧核糖核酸（cDNA）的过程。

3.53.5

聚合酶链反应polymerasechainreaction，PCRreaction，PCRchainpolymerase聚合酶链反应

一种在体外快速扩增特定脱氧核糖核酸（DNA）片段的方法。热