GB/T 17817-2024 饲料中维生素A的测定 高效液相色谱法

ICS

65.120

CCS

B46

中华人民共和国国家标准

GB/T17817—2024

代替GB/T17817－2010

饲料中维生素A的测定高效液相

色谱法

DeterminationofvitaminAinfeeds—Highperformanceliquidchromatography

2024-11-28发布2025-06-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T17817—2024

目次

前言

·····································································································

Ⅲ

1

范围

··································································································

1

2

规范性引用文件

······················································································

1

3

术语和定义

···························································································

1

4

第一法皂化提取法

·················································································

1

4.1

原理

······························································································

1

4.2

试剂或材料

······················································································

1

4.3

仪器设备

·························································································

2

4.4

样品

······························································································

2

4.5

试验步骤

·························································································

3

4.6

试验数据处理

····················································································

6

4.7

精密度

···························································································

7

5

第二法直接提取法

·················································································

7

5.1

原理

······························································································

7

5.2

试剂或材料

······················································································

7

5.3

仪器设备

·························································································

7

5.4

样品

······························································································

8

5.5

试验步骤

·························································································

8

5.6

试验数据处理

····················································································

8

5.7

精密度

···························································································

9

附录A（规范性）

维生素A和维生素A乙酸酯标准储备溶液的质量浓度校正方法

················

10

附录B（资料性）

在线固相萃取阀的切换流程图

····················································

11

附录C（资料性）

维生素A标准溶液的液相色谱图

·················································

12

附录D（资料性）

维生素A乙酸酯标准溶液色谱图

·················································

14

Ⅰ

GB/T17817—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

本文件代替GB/T17817—2010《饲料中维生素A的测定高效液相色谱法》，与GB/T17817—

2010相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：

a）更改了适用范围，增加了精料补充料和复合预混合饲料，更改了“第二法直接提取法”定量

限（见第1章，2010年版的第1章）；

b）增加了“第一法皂化提取法”中维生素A标准系列溶液（见4.2.19）;

c）将“第一法皂化提取法”中配合饲料、精料补充料、浓缩饲料样品制备方法更改为试样全部

通过1mm孔筛（见4.4，2010年版的3.5）；

d）将“第一法皂化提取法”提取剂更改为“石油醚”（沸程30℃～60℃）（见.1，

2010年版的）；

e）增加了离线固相萃取法（见.2）和在线固相萃取法（见.3）；

f）删除了正相色谱条件（见2010年版的.1）；

g）增加了液相色谱参考条件（见和）；

h）增加了定性检测方法，定量检测增加多点校正（见，）；

i）更改了“第一法皂化提取法”中试验数据处理（见4.6，2010年版的.1）；

j）在“第二法直接提取法”中增加了维生素A标准系列溶液（见5.2.5）；

k）更改了“第二法直接提取法”提取温度，由65℃改为室温（见5.5.1，2010年版的4.6.1）；

l）更改了“第二法直接提取法”中试验数据处理（见5.6，2010年版的）；

m）增加了校正维生素A及维生素A乙酸酯标准储备溶液质量浓度的方法（见附录A）；

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。

本文件起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、山东省畜产品质量安全中心、

帝斯曼维生素（上海）有限公司、四川威尔检测技术股份有限公司、中牧实业股份有限公司、广州爱保

农生物科技有限公司。

本文件主要起草人：赵小阳、宋荣、虞哲高、张凤枰、刘向阳、朱高群、刘志英、郭红双、汪忠艳、

张玮、谢丽、李丽蓓、张辉、宋艳、冯秀燕、曹林。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：

—1999年首次发布为GB/T17817—1999，2010年第一次修订；

—本次为第二次修订。

Ⅲ

GB/T17817—2024

饲料中维生素A的测定高效液相

色谱法

1范围

本文件描述了饲料中维生素A的高效液相色谱测定方法。

本文件中“第一法皂化提取法”适用于配合饲料、精料补充料、浓缩饲料、复合预混合饲料、维

生素预混合饲料中维生素A的测定；“第二法直接提取法”适用于复合预混合饲料、维生素预混合饲

料中维生素A乙酸酯的测定。

本文件第一法定量限为1000IU/kg，第二法定量限为20000IU/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用

于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4第一法皂化提取法

4.1原理

试样用碱溶液皂化后，经液液萃取或固相萃取净化后，用高效液相色谱仪分离测定，外标法定量。

4.2试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

4.2.1水：GB/T6682，一级。

4.2.2无水乙醇：色谱纯。

4.2.3石油醚（沸程30℃~60℃）。

4.2.4甲醇：色谱纯。

4.2.5乙腈：色谱纯。

4.2.6异丙醇：色谱纯。

4.2.795%乙醇。

4.2.8L﹘抗坏血酸。

4.2.9二丁基羟基甲苯（BHT）。

4.2.10无水硫酸钠。

4.2.11氢氧化钾溶液（500g/L）：称取500g氢氧化钾，加水溶解，冷却后用水定容至1L，混匀。

1

GB/T17817—2024

4.2.12乙醇溶液Ⅰ（70%，体积分数）：量取无水乙醇70mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。

4.2.13乙醇溶液Ⅱ（50%，体积分数）：量取无水乙醇50mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。

4.2.14甲醇溶液（10%，体积分数）：量取甲醇10mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。

4.2.15甲酸溶液（0.1%，体积分数）：量取甲酸1mL，用水稀释，定容至1L，混匀。

4.2.16乙醇溶液Ⅲ（40%，体积分数）：量取无水乙醇40mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。

4.2.17乙腈﹘异丙醇混合溶液[V（乙腈）∶V（异丙醇）=50∶50]：量取50mL乙腈与50mL异丙

醇混合均匀，超声脱气。

4.2.18维生素A标准储备溶液（1000IU/mL）：称取维生素A乙酸酯标准品（CAS号：127﹘47﹘9，

纯度≥95.0%，或标准物质/标准样品）34.4mg（精确至0.00001g），置于皂化瓶中，进行皂化

（）和提取（.1），将石油醚提取液全部浓缩蒸发至干，用无水乙醇（4.2.2）溶解残渣，

置于预先加入100mgBHT的棕色容量瓶中，稀释至刻度，混匀后，－20℃~－18℃避光保存，有效期

6个月。临用前将储备溶液回温至室温，按照附录A规定进行浓度校正。

4.2.19维生素A标准系列溶液：准确移取适量标准储备溶液（4.2.18），置于100mL棕色容量瓶中，

液液萃取法和固相萃取法用无水乙醇（4.2.2）稀释并定容，混匀；配制成质量浓度分别为0.2IU/mL、

0.5IU/mL、1IU/mL、5IU/mL、10IU/mL、20IU/mL、50IU/mL标准系列溶液，临用现配；在

线固相萃取法用乙醇溶液Ⅱ（4.2.13）稀释并定容，混匀，配制成质量浓度分别为0.16IU/mL、

0.40IU/mL、0.80IU/mL、1.60IU/mL、4.0IU/mL、8.0IU/mL、16.0IU/mL标准系列溶液，临用

现配。

4.2.20酚酞指示剂（10g/L）：称取1g酚酞，用95%乙醇（4.2.7）溶解，稀释至100mL，混匀。

4.2.21固相萃取柱：填料为聚苯乙烯﹘二乙烯基苯聚合物，200mg/6mL，或性能相当者。

4.2.22在线固相萃取柱：填料为聚苯乙烯﹘二乙烯基苯聚合物，长度为12.5mm，内径为4.6mm，粒径

为15µm～20µm，或性能相当者。

4.2.23微孔滤膜：孔径0.2μm，有机系。

4.2.24氮气：纯度99.9%。

4.3仪器设备

4.3.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器；在线柱切换﹘液相色谱系统：配有紫外

检测器。

4.3.2紫外可见分光光度计：带1cm石英比色皿。

4.3.3分析天平：精度分别为0.001g、0.0001g和0.00001g。

4.3.4回流装置：圆底烧瓶和冷凝管。

4.3.5恒温水浴：控温精度±