DB37/T 3405-2018 动物微生物饲料添加剂中植物乳杆菌的检测

ICS65.120

B04

DB37

山东省地方标准

DB37/T3405—2018

动物微生物饲料添加剂中植物乳杆菌的检

测

MethodfordeterminationofLactobacillusplantaruminanimalmicrobialfeed

additives

2018-08-17发布2018-09-17实施

山东省质量技术监督局发布

DB37/T3405—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出。

本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。

本标准由主要起草单位：山东农业大学、山东戴尔塔生物工程有限公司、济宁滨阳生物科技股份有

限公司、泰安市高新区同心共筑生物科技有限公司、济宁市任城区畜牧兽医局、泰安市新众发生物技术

有限公司、泰安市圣达富生物技术推广中心、南京福海生物科技有限公司、南京根洋生物科技有限公司、

泰安智博生物科技有限公司。

本标准主要起草人：王雪鹏、闫硕、常维山、戴培强、孙杰、张洪喜、王焕高、李福昌、刘建柱、

马洪超。

I

DB37/T3405—2018

动物微生物饲料添加剂中植物乳杆菌的检测

1范围

本标准规定了饲用微生物添加剂中植物乳杆菌的检验方法。

本标准适用于饲用微生物添加剂和饲料中植物乳杆菌的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

GB/T8170-2008数值修约规则与极限数值的表示和判定

3术语和定义

下列术语及定义适用于本标准。

3.1

植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）

是乳酸菌的一种，厌氧或兼性厌氧。菌体为直或弯的杆状，革兰氏阳性菌。单个、有时成对或成链

状排列，最适生长pH6.2，属于同型发酵乳酸菌。

4试剂及仪器

4.1试剂

4.1.1MRS碳酸钙培养基：见附录中A.1。

4.1.2厌氧包：商品化厌氧包，根据培养罐容积和厌氧包说明确定用量。

4.1.3山梨醇发酵管：见附录中A.2。

4.1.4棉子糖发酵管：见附录中A.2。

4.1.5甘露醇发酵管：见附录中A.2。

4.1.6蔗糖发酵管：见附录中A.2。

4.1.7水杨苷发酵管：见附录中A.2。

4.1.8纤维二糖发酵管：见附录中A.2。

4.1.9七叶苷发酵管：见附录中A.3。

4.1.10革兰氏染色液：见附录中A.4。

4.1.11硝酸盐培养基、硝酸盐试剂:见附录中A.5。

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4.1.12明胶培养基：见附录中A.6。

4.1.13过氧化氢酶检验：见附录中A.7。

4.2仪器

4.2.1恒温培养箱：36℃±1℃。

4.2.2普通冰箱：0℃～4℃。

4.2.3恒温水浴锅：46℃±l℃。

4.2.4电炉：温度为可调式。

4.2.5吸量管：容量分别为1mL、10mL、25mL。

4.2.6广口瓶或三角瓶：容量为500mL。

4.2.7培养皿：直径为90mm。

4.2.8试管：18mm×180mm。

4.2.9光学显微镜：10×100倍。

4.2.10高压灭菌锅：使用温度为121℃。

4.2.11烘干箱：使用温度为160℃。

4.2.12厌氧培养罐：2L～10L。

4.2.13玻璃珠：直径为4mm～5mm。

4.2.14振荡箱：可调式，振荡频率为0rpm～200rpm。

5样品准备

5.1样品的采集

所采样品真实、具有代表性。采样工具，如铲子、匙、采样器、试管、广口瓶、剪子等，灭菌后使

用。采样数量和方法按照GB/T14699.1执行。

5.2试样的制备

按照GB/T20195进行试样的制备。

6操作步骤

6.1样品稀释

准确称取样品25.0g，加入含有50个玻璃珠和225mL生理盐水的500mL灭菌三角瓶中。

200rpm振荡箱振荡处理0.5h～1h，即得1:10初始稀释液。吸取初始稀释液1mL于含9mL无

菌生理盐水试管中，即得1:100稀释液。根据样品含菌量，做进一步的十倍系列递增稀释。

6.2样品接种

选取3个适宜的稀释度，吸取1mL6.1所述稀释液于灭菌培养皿内。每个稀释度移种2个培养

皿。注入已预冷至50℃的MRS碳酸钙培养基15mL左右，混匀。

6.3培养

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植物乳杆菌计数培养基凝固后，翻转培养皿，置于厌氧培养罐中，放入厌氧包，密封后放入36℃

±1℃恒温培养箱内，36℃培养48h～72h。

6.4菌落计数

观察菌落形态，选择菌落数30～300的培养皿，计数带有溶钙环的典型菌落。

7确证试验

7.1菌落特征

将典型单个菌落在MRS碳酸钙培养基上划线分离，厌氧培养24h～72h，观察菌落形态。

7.2菌体形态

每个培养皿挑取至少1个典型的菌落进行革兰氏染色、镜检。革兰氏染色方法见附录A.4。

7.3生理生化确证试验

挑取典型菌落分别接种麦芽糖、甘露醇、山梨醇、棉子糖、蔗糖、七叶苷、水杨苷、纤维二糖的生

化反应管，并进行过氧化氢酶、硝酸盐还原、液化明胶试验。

7.4确证结果

7.4.1菌落形态

菌落为乳白色，圆形，不透明，菌落直径1mm～3mm。菌落周围培养基有透明环，透明环直径1

mm～3mm。

7.4.2菌体形态

植物乳杆菌应为革兰氏阳性、单个存在的丝状杆菌，无芽孢。

7.4.3糖发酵试验

植物乳杆菌的碳水化合物发酵试验结果见表1。

表1植物乳杆菌的碳水化合物发酵试验结果

麦芽糖甘露醇山梨醇棉子糖蔗糖