DB34/T 2776-2016 谷物中10 种真菌毒素的测定 液相色谱串 联质谱法

ICS67.040

C53

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2776—2016

谷物中10种真菌毒素的测定液相色谱串

联质谱法

Determinationof10mycotoxinsingrainbyliquidchromatographytandemmass

spectrometry

文稿版次选择

2016-12-30发布2017-01-30实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2776—2016

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业部农产品质量安全风

险评估实验室（合肥）、安徽省畜牧技术推广总站、池州市农产品质量安全监测中心、安徽科立特农药

环境科技评价有限公司、繁昌县植保站。

本标准起草人：段劲生、高同春、孙明娜、王梅、李瑞、董旭、肖青青、褚玥、许四五、吴爱美、

彭卫兵、朱玉杰、杨通。

I

DB34/T2776—2016

谷物中10种真菌毒素的测定液相色谱串联质谱法

1范围

本标准规定了谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）等10种真菌毒素（参见附录A和附录D）残留量

的液相色谱串联质谱测定方法。

本标准适用于小麦、大米和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素（DON、15A-DON、3A-DON），黄曲霉素

(B1、B2、G1、G2)，伏马毒素(FB1、FB2)和玉米赤霉烯酮(ZEA)残留量的测定。

方法的检出限为0.0002～1.0mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与

再现性的基本方法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试样用乙腈+醋酸水溶液提取，经分散吸附剂净化，液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）定性确证和

定量检测，外标法定量。

4试剂与材料

4.1水为GB/T6682规定的二级水。

4.2乙腈：色谱纯。

4.3乙酸（冰醋酸）：分析纯。

4.4氯化钠：分析纯。

4.5无水硫酸镁：分析纯。

4.6PSA：分析纯，粒径40～60μm。

4.7氨水：色谱纯。

4.8乙酸铵：色谱纯。

4.9甲酸：色谱纯。

4.100.22μm微孔过滤膜。

4.11真菌毒素标准品（纯度≥95％）。

4.12标准储备溶液：

1

DB34/T2776—2016

——分别称取10种真菌毒素标准品，用乙腈配制成1000mg/L的上述10种真菌毒素的各自标准

储备溶液，于0～4℃下避光保存，有效期3个月。

4.13基质混合标准工作溶液：

——将10种标准储备液用空白样品基质溶液配制成不同浓度的基质混合标准工作溶液，待用。

——基质标准工作液现配现用。

4.140.01％氨水溶液：移取0.1mL氨水（4.6）于1000mL水中，混匀。

4.152mmol/L乙酸铵+0.1％甲酸溶液：称取0.1542g乙酸铵（4.7）加少量水溶解，再加入1.0mL

甲酸（4.8），混匀，定容到1000mL，配成含0.1％甲酸的2mmol/L的乙酸铵溶液，过0.22μm微孔

滤膜。

5仪器和设备

5.1液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。

5.2万分之一分析天平。

5.3匀浆仪。

5.4超声波清洗器。

5.5离心机，转速不低于3000r/min。

5.6旋转蒸发仪。

5.7氮吹仪。

5.8涡旋仪。

5.9移液器。

6分析步骤

6.1试样的制备与贮藏

按照GB5491的规定分别将不少于1000g小麦、大米（已脱壳）、玉米籽粒混匀，四分法取样，

放入食品加工机粉碎，过20目筛，制成试样，放入试样瓶中密封，做上标记，并置于-20℃条件下保

存，待测。

6.2提取

称取样品21.0g（精确至0.01g），加入含1％乙酸(冰醋酸）的乙腈：水=84:16（V:V）混合溶

剂50mL，振荡30min，超声提取10min，加入适量氯化钠，5000r/min离心3min，取上清夜2mL，

待净化。

6.3净化

取2mL上述乙腈提取液于5mL玻璃试管中，加入200mg无水硫酸镁吸附剂，涡动混合1min，

静置，过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

6.4测定条件

6.4.1液相色谱条件

a)色谱柱：C18分析柱，150mmL.×2.0mm,I.D.2.2μm；

b)流动相：

2

DB34/T2776—2016

——A：0.01％氨水溶液；

——B：甲醇；

——C：含2mmol/L的乙酸铵和0.1％甲酸的水溶液；

——D：乙腈；

——液相色谱流动相梯度洗脱具体见表1、表2。

c)流速：400μL/min；

d)柱温：40℃；

e)进样量：5μL。

表1液相流动相梯度洗脱程序（测DON、15A-DON、3A-DON）

时间流速流动相A（0.01％氨水溶液）流动相B（甲醇）

minmL/min％％

2.00.41090

4.00.41090

4.10.49010

5.00.49010

表2液相流动相梯度洗脱程序（测黄曲霉素B1、B2、G1、G2、伏马毒素FB1、FB1、ZEA）

时间流速流动相C（含2mmol/L的乙酸铵和0.1％甲酸的水）流动相D（乙腈）

minmL/min％％

0.50.47030

3.50.41090

5.00.41090

5.10.47030

6.00.47030

6.4.2质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源（ESI），450℃；

b)扫描方式：正负离子扫描；

c)检测方式：多反应监测（MRM）；

d)干燥气温度：250℃；

e)干燥气流速：20L/min；

f)雾化器流速：3.0L/min；

g)离子源接口电压：ESI+，+4.5kV；ESI-，-3.5kV

h)10种真菌毒素监测离子对、保留时间、碰撞电压及碰撞能量参见附录B。

6.5液相色谱-质谱/质谱测定

6.5.1定性测定

在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品一致，并且在扣除背

景后的样品质谱图中，所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度>50％，允许±

20％偏差；相对丰度>20～50％，允许±25％偏差；相对丰度>10～20％，允许±30％偏差；相对丰度

≤10％，允许±50％偏差）。

3

DB34/T2776—2016

6.5.2定量测定

本方法采用外标校准曲线法单离子定量测定。

为了减少基质对定量测定的影响，需用空白样液来制备所使用的一系列基质标准工作溶液，用基质

标准工作溶液按浓度由小到大的顺序，分别进样来绘制标准曲线。并且保证所测试样中真菌毒素的响应

值均在仪器的线性范围内。

混合基质标准溶液的液相色谱质谱/质谱多反应监测（MRM）色谱图参见附录C。

6.6平行试验

按以上步骤，对同一试样进行平行测定。

6.7空白实验

除不称取试样外，均按上述步骤测定。

7结果计算

7.1标准曲线

使用基质标准工作溶液进样，绘制基质标准工作曲线。待测物残留的响应值应在检测方法的线性范

围之内。

7.2结果计算和表述

试样中10种真菌毒素的残留量按公式（1）计算：

V

cX.....................................(1)

i