YC/T 166-2003 烟草和烟草制品 总蛋白质含量的测定

YC/T166-2003

Pi1舌

本标准是参照ISO/CD15677和美国公职分析化学家协会(AOAC《分析方法手册》(第十四版)中

3.148--3.150制定的。

在参照ISO/CD15677的同时，考虑到国内烟草行业对总氮含量的测定方法，尽量在可溶性氮的测

定步骤上与YC/T33保持一致，因此亦参考了AOAC分《析方法手册》。

本标准由国家烟草专卖局提出。

本标准由全国烟草标准化技术委员会(TC144)归口。

本标准起草单位:国家烟草质量监督检验中心。

本标准主要起草人:王芳、张艳革、李萍、杨进。

YC/T166-2003

烟草和烟草制品

总蛋白质含量的测定

范围

本标准规定了克达尔法测定烟草及烟草制品中蛋白质氮的方法。

本标准适用于烟草和烟草制品。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T5606.1卷烟抽样

YC/T5烟草成批取样的一般原则

YC/T31烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法

3原理

用乙酸沉淀烟草样品中的蛋白质氮，然后在浓硫酸及催化剂作用下转化为硫酸钱。强碱蒸馏释放

出氨，用标准酸液接收。反滴定。

4试荆

所有试剂均应为分析纯级，水应为蒸馏水或至少同等纯度的水。

4.1锌粒。

4.2浓硫酸:d"=1.84g/mL(该试剂可引起严重烧伤)。

4.3红色氧化汞。

4.4硫酸钾。

4.5氢氧化钠一硫代硫酸钠溶液:将500g氢氧化钠和40g硫代硫酸钠(NaiS2Oa·H)0,5溶于水，稀

释至1L

4.6乙酸，质量分数为。.5%0

4.7硫酸钱溶液，0.1mol/L

4.8硫酸标准滴定溶液，c(0.5H2S0,)=0.1mol/L,

4.9氢氧化钠标准滴定溶液,c(NaOH)=0.1mol/Lo

4.10甲基红指示剂，0.1%e

5仪器设备

51分析天平，精确至。.0002g,

25抽滤装置，直径120mm布氏漏斗，真空抽滤装置。

53蒸馏装置，500mL克氏烧瓶，连接头，4-5球冷凝管和300mL锥形瓶。

锥形瓶，300mL.

:.:

克氏烧瓶，500ml。

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65移液管，25ml,.

57滴定管，50mL(0.1ml_刻度)。

85量筒，25mL,100mL,250mL.

95.定量滤纸，无氮。

6分析步骤

6.1抽样

6.1.1烟叶

按YC/T5抽取烟叶作为实验室样品。

6.1.2卷烟

按GB/T5606.1抽取卷烟作为实验室样品。

6.2试样的制备

按YC/T31制备试样。

6.3测定次数

每个试样应平行测定两次。

6.4水分含f的测定

按YC/T31测定试样的水分含量。

6.5萃取

称取约1.5g(精确至0.0002g)试料置于300mL锥形瓶((5.4)内，加人75mL乙酸溶液((4.6)，加

热保持沸腾15min。迅速用定量滤纸(5.9)在真空抽滤装置((5.2)内进行抽滤，并用乙酸溶液冲洗锥形

瓶和沉淀物至滤液无色。然后转移滤纸和沉淀于克氏烧瓶(5.5)中。

6.6消化

向克氏烧瓶中加人。.7g红色氧化汞((4.3),10g硫酸钾((4.4)及25mL浓硫酸((4.2),混合均匀。

将克氏烧瓶移人通风橱内，斜置于定氮架上，瓶颈与水平面成450-600夹角。缓慢加热，待泡沫停

止，溶液澄清后，再继续煮沸1h。冷却，用约50mL-70mL水冲洗瓶颈。

6.7蒸馏

向克氏瓶中加人约200mL水，加锌粒(4.1)三颗，沿瓶壁小心加人氢氧化钠一硫代硫酸钠溶液((4.5)

90ml。

立即连接于蒸馏装置上，用内有25mL硫酸标准滴定溶液((4.8)和3-4滴指示剂((4.10)的锥形瓶

(5.4)作接收器。冷凝管末端应浸人酸液中。

蒸馏直到馏出液体积达150mL,

注:氢氧化钠一硫代硫酸钠溶液应小心加人，以避免温度迅速升高而失去氨。燕馏过程中三角瓶中液体应保持红色

否则，应减少称样量重新消化蒸馏。

蒸馏结束，移开锥形瓶，以免倒吸，用水冲洗冷凝管末端。

6.8滴定

用氢氧化钠标准滴定溶液((4.9)滴定馏出液至指示剂颜色由红色变为无色即为终点。

69测试

6.9.1空白试荆测试

用等量的蔗糖替代样品测试，重复6.6,6.7和6.8,

该滴定的终点应是有效的零点，并对滴定((6.8)进行校正。

如果误差较小，对样品测试值加以修正。如果误差较大，应查找哪一种试剂引人了氮或者设备的某

位置消耗了氢氧化钠。纠正错误并重复测试。

注:假设任何不含氮的有机化合物，带有含氮的或派生氮的试剂也可能被使用，会引起同样的反应。

2

YC/T166-2003

6.9.2仪器校验测试

6.9.2.1蒸馏装置的测试

加人10mL硫酸钱溶液((4.7)于蒸馏瓶中，然后继续6.7和6.8操作。结果偏低，是由于蒸馏不完

全或仪器可能有渗漏。纠正错误并重复测试.

注:在蒸馏仪器第一次使用和以后，应定时执行这种校验测试.

6.9.2.2方法的测试

测定己知氮含量0.5g的有机氮化合物的混合物，如色氨基酸、赖氨酸、丙氨酸、亮氨酸等和0.5g

的无有机氮化合物(蔗搪或葡萄糖)进行6.6,6.7和6.8操作。

结果偏低，应是6.9.2.1的原因，或由于消化期间产物的丢失，消化不充分(如加热温度不合适或催

化剂质量太差)。

注:在实验室第一次采用这种方法时讲行该校聆

7结果的计算与表述

蛋白质含t的计算方法

样品的蛋白质含量P以干燥样品的百分比表述，由式((1)得出:

n，。，、[(V,一Vo)Xc;一ViX。:〕X14、，，__n/

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式中:

6.25—蛋白质中氮的转换系数;

Va—空白滴定消耗硫酸标准溶液的体积，单位为毫升(mL);

V,硫酸标准溶液的体积，单位为毫升(ML);

V2—滴定耗用的氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升(mL);

‘—硫酸标准溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L);

c2氢氧化钠标准溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L);

m—烟草样品质量，单位为克(g);

W—烟草样品的水分百分含量，YOo

7.2结果的表述

以两次平行测定的平均值作为测定结果，精确至0.01%.

7.3精密度

两次平行结果绝对值之差不应大于。.20%.