T/DALN 039-2025 牛病毒性腹泻、粘膜病诊断技术规程

主要技术内容:3.1牛病毒性腹泻-黏膜病牛病毒性腹泻-黏膜病（BVD-MD）发病率高，是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的主要发生于牛的一种急性、热性传染病，具有一定的致死率，且存在持续感染、免疫抑制的情况，对养牛产业造成了较大的危害。3.2牛病毒性腹泻-黏膜病临床症状BVD-MD的主要临床症状表现为腹泻、高热、黏膜溃疡，消化道呈线性病变，伴随精神不振、厌食、呼吸系统疾病、消化系统疾病，严重者出现血便等，潜伏期一般为5～7d。可分为3个类型，急性型、持续感染型（PI）和黏膜病（MD）。4  原理4.1 竞争法荧光抗体检测利用荧光素标记抗体，使之在涂片上或组织切片上与标本中的待测抗原特异性地结合，采用高发光效率的点光源，透过滤色板发出一定波长的光，使结合在标本上的荧光素被激发而产生荧光，借助荧光显微镜观察底物片上荧光染色形态，可以判断有无待测抗原或抗体。4.2免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）免疫过氧化物酶单层细胞试验，其主要原理是通过抗原抗体的相互作用，产生特异性显色反应，通过光学显微镜肉眼即可观察并判定结果4.3微量血清中和试验动物受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，因而阻止病毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。中和试验是以测定病毒的感染力为基础，以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，来判定免疫血清中和病毒的能力。4.4 抗原捕获酶联免疫吸附试验（RT-PCR）RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。5 临床诊断5.1持续感染型（PI）慢性病例临床症状不明显或逐渐发病，生长发育受阻，消瘦,体重逐渐下降，PI牛大多数表面健康，但其终生带毒排毒，且在其体内检测不到抗体，是牛场净化BVDV最大的阻碍。5.2急性型牛一般为突然发病,体温升高、发热,血液中白细胞减少,精神沉郁,眼睛和鼻腔有液体分泌物流出,口腔和鼻镜黏膜溃烂,严重腹泻,便血,整个消化道出现糜烂性或溃疡性病灶,通常于发病后1～2周急性死亡,康复的病例较少。5.3黏膜病（MD）黏膜病是牛感染BVDV最为严重的类型，死亡率极高，几乎达到100%，黏膜病（MD）类型初期不表现临床症状，在表现临床症状后1周左右死亡。5.4急