DB22/T 2049-2014 动物源性饲料中鸭源性成分测定 PCR方法

ICS65.120

B46

DB22

吉林省地方标准

DB22/T2049—2014

动物源性饲料中鸭源性成分测定

PCR方法

Determinationofduckderivedmaterialsinanimal-originatedfeedstuffs

PCRmethod

2014-02-28发布2014-04-30实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T2049—2014

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。

本标准主要起草单位：吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华

人民共和国吉林出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：史艳宇、刘金华、邴炜、王莹、周亮、吕航、郎乐、张庆波、宫国强。

I

DB22/T2049—2014

动物源性饲料中鸭源性成分测定PCR方法

1范围

本标准规定了动物源性饲料中鸭源性成分的PCR检测方法，该方法的检出限为0.1%。

本标准适用于动物源性饲料中鸭源性成分的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

鸭源性成分duck-derivedmaterials

鸭种属特异性DNA片段。

4原理

对样品进行DNA提取，通过PCR扩增，检测鸭特异性基因片段。

5试剂和材料

除特别说明以外，所有试剂均为分析纯，水为按照GB/T6682规定的一级水。所有试剂均用无DNA

酶污染的容器分装。

5.1鸭源性成分检测用引物（对）序列为：

a)上游引物：5’-CATCTATCCTGCTAGCCGCC-3’

b)下游引物：5’-GGCTTGAGTGGAAGAATGCC-3’

5.2TaqDNA聚合酶。

5.3dNTP：dATP（deoxyadenosinetriphosphate，脱氧腺苷三磷酸）、dGTP（deoxyguanosinatriphosphate，

脱氧鸟苷三磷酸）、dCTP（deoxycytidinetriphosphate，脱氧胞苷三磷酸）、dTTP（deoxythymidine

triphosphate，脱氧胸苷三磷酸）。

5.4动物基因组DNA提取纯化试剂盒。

5.5RNaseA酶：冻干品，不含DNase。

5.6蛋白酶K：冻干品。

5.7三羟甲基氨基甲烷（Tris）。

5.8Tris饱和苯酚。

1

DB22/T2049—2014

5.9三水合乙酸钠、氯化钠。

5.10十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammoniumbromide，CTAB）。

5.11乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA-Na2·2H2O）。

5.1275%乙醇、异丙醇、三氯甲烷、异戊醇、正己烷等有机试剂。

5.1310×PCR缓冲液：含200mmol/LTris-HCl（pH8.4），200mmol/L氯化钾（KCl），15mmol/L氯

化镁（MgCl2）。

5.14分子量标记：100bp~3000bpDNAMarker。

5.15酶切缓冲液：含10mmol/LTris-HCl（pH7.5），10mmol/LMgCl2，50mmol/LNaCl，0.1mg/mL

BSA。

5.16RNaseA酶溶液：用高压灭菌的去离子水溶解RNaseA酶为10mg/mL的溶液，分装后于-20℃

保存，避免反复冻融。

5.17蛋白酶