DB37/T 4032-2020 非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范

ICS11.220

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T4032—2020

非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范

TechnicalspecificationforisothermalamplificationdetectionofAfricanswinefever

2020-07-09发布2020-08-09实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T4032—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所、山东师范大学、中国动物卫生与流行病学中

心、山东鼎科检测技术有限公司、潍坊安普未来生物科技有限公司、上海基灵生物科技有限公司、潍坊

汉森生物饲料科技有限公司。

本标准主要起草人：孙文博、吴家强、陈蕾、殷斌、陈智、吴晓东、蒋文明、刘国宪、郑乾坤、李

敏、杜以军、于江、时建立、吴香菊、李俊、丛晓燕、郭立辉。

I

DB37/T4032—2020

非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范

1范围

本标准规定了非洲猪瘟病毒（ASFV），英文缩略表见附录D，核酸的重组酶聚合酶扩增（RPA）检测

技术的要求。

本标准适用于非洲猪瘟的快速检测、诊断、检疫、监测和流行病学调查。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

核酸恒温扩增技术是依赖解旋酶解开双链DNA，依赖单链DNA结合蛋白与模板单链结合，使模板处于

单链状态并保护它的完整性。引物与模板杂交，然后在DNA聚合酶的催化下开始扩增。

4试剂或材料

除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。

4.1水：GB/T6682，一级水。

4.21×PBS溶液(pH值7.4)：配制见附录A.1。

4.3核酸提取试剂：

a)蛋白酶K溶液（20mg/mL）：配制见附录A.2；

b)10%十二烷基硫酸钠（SDS溶液，pH7.2）：配制见附录A.3；

c)Tris平衡酚；

d)三氯甲烷；

e)70%乙醇：配制见附录A.4。

4.4重组酶聚合酶恒温扩增试剂盒。

4.5DEPC水。

4.6恒温扩增检测的引物：恒温扩增检测引物见附录B.1。

4.7无水乙醇。

4.8微量移液器配套的带滤芯吸头。

4.9离心管：1.5mL。

5主要仪器设备

1

DB37/T4032—2020

5.1微量移液器：最大量程分别为10μL、20μL、100μL、1000μL。

5.2生物安全柜。

5.3普通冰箱。

5.4涡旋振荡器。

5.5研磨管。

5.6荧光定量PCR仪：Peltier加热，≥16孔（0.2mL，2×8联管和单管）。

5.7电子天平：感量为0.001g。

5.8低温高速台式离心机：离心力≥8000g。

6样品

6.1基本要求

应符合GB19489—2008和NY/T541—2016中关于实验室生物安全和兽医诊断样品采集、保存与运输

的要求。

6.2样品采集

6.2.1棉拭子样品

无菌操作，采集猪口腔拭子。

6.2.2组织样品

无菌操作，取猪的脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结、肌肉等组织样品