NY/T 678-2003 猪伪狂犬病免疫酶试验方法

ICS11.220

B41

中华人民共和国农业行业标准

NY/T678-2003

猪伪狂犬病免疫酶试验方法

Enzymeimmunoassayforporcniepseudorabies

2003-07-30发布2003-10-01实施

中华人民共和国农业部发布

NY/'C678-2003

前A

本标准的附录A是规范性附录

本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口

本标准起草单位:农业部兽医诊断中心。

本标准主要起草人:王宏伟、吴清民、童光志、田克恭、陈西钊、苏敬良、卜传彬

NY/T678-2003

猪伪狂犬病免疫酶试验方法

范围

本标准规定了猪伪狂犬病E糖蛋白((gE，即gpI)酶联免疫吸附试验和免疫酶组织化学试验方法。

本标准适用于检测猪血清中的猪伪狂犬病病毒gE特异性抗体和组织中的猪伪狂犬病病毒抗原。

2E糖蛋白酶联免疫吸附试验(gE-ELISA)

2.1材料准备

2.1.1试荆

a)ELISA抗原包被板;

b)标准阳性血清:伪狂犬病病毒gE单克隆抗体:

C)标准阴性血清:无伪狂犬病病毒gE抗体的猪血清;

d)酶结合物:辣根过氧化物酶(HAP)标记的抗伪狂犬病病毒gE单克隆抗体;

c)磷酸盐缓冲液(PBS)配制见第A.l章:

f)洗涤液:配制见第A.2章;

g)样品稀释液:配制见第A.3章;

,1)底物溶液:配制见第A.5章;

I)终止液:配制见第A.6章口

2.1.2器材

a)酶联检测仪;

b)微量加样器，容量50川一200川;

。)370C恒温培养箱。

2.1.3样品

采集被检猪血液，分离血清，血清应新鲜、透明、不溶血、无污染.密装于灭菌小瓶内，飞℃或一30℃保

存或立即送检。试验前将被检血清统一编号，并用样品稀释液作2倍稀释」

2.2操作方法

2.2.1取出包被板，并将样品位置准确记录在记录单上.

2.2.2向AA;,A，孔中分别加人100川_未经稀释的阴性对照血清.AA},A。孔中分别加人

100川未经稀释的阳性对照血清，其他各孔加人100川稀释好的待检样品。

2.2.3置室温1he

2.2.4弃去孔内液体，再在纱布或吸水纸上拍千

2.2.5用洗涤液将反应板洗涤(3.5)次，每次洗涤后均弃去孔内液体最后一次洗涤后，除净孔内液

体，拍干。

2.2.6每孔加人