NY/T 681-2003 鸡传染性贫血诊断技术

NY/T681-2003

前言

本标准的附录A为规范性附录。

本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。

本标准起草单位:农业部兽医诊断中心。

本标准主要起草人:王宏伟、吴清民、田克恭、陈西钊、苏敬良、王传彬。

NY/T681-2003

鸡传染性贫血诊断技术

范围

本标准规定了鸡传染性贫血(CIA)的临床诊断、CIA病毒的分离与鉴定、酶联免疫吸附试验和免疫

酶试验等诊断技术。

本标准适用于CIA的诊断。

1右床诊断

2.1临床症状

2.1.1CIA的主要临床特征是贫血。病鸡表现精神萎靡、虚弱、聚堆及行动迟缓，羽毛粗乱，嚎、肉髯、

面部和可视勃膜苍白，羽部有出血病灶，生长不良，排白稀粪。

2.1.2产蛋种鸡感染无临床症状，产蛋率、受精率和孵化率均不受影响，但可通过种蛋传播病毒。

2.1.3当有马立克氏病、传染性法氏囊病等免疫抑制性疾病发生时，雏鸡对鸡传染性贫血病毒

(CIAV)的易感性增高，发病早且严重。

2.2病理变化

2.2.1病鸡表现再生障碍性贫血，消瘦，骨髓发白，肌肉及内脏器官苍白，肝脏、肾脏肿大并褪色，血液

稀薄，凝血时间延长。

2.2.2病鸡表现全身性淋巴组织萎缩，胸腺、法氏囊、脾脏和盲肠、扁桃体以及其他组织内淋巴细胞严

重缺失。

病毒分离与鉴定

3.1材料准备

3.1.1试荆

a)改良最低要素营养液(DMEM)培养基，配方见第A.1章;

b)马立克氏病病毒转化的淋巴细胞系MDCC-MSB1细胞;

c)标准阳性血清:用CIAV抗原免疫SPF鸡获得的血清;

d)标准阴性血清:无CIAV感染的SPF鸡血清;

e)新生牛血清、青霉素、链霉素。

3.1.2器材

a)细胞培养瓶;

b)吸管;

c)二氧化碳培养箱;

d)37℃恒温水浴箱;

e)普通冰箱及低温冰箱;

f)离心机及离心管;

9)研磨器械;

h)普通光学显微镜;

i)微量加样器，容量5pL-50pL,50pL-200.IL;

j)0.45ym微孔滤膜。

3.1.3样品

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CIAV存在于病鸡肝脏、皮肤、脾脏、心脏、胸腺、肺脏、法氏囊、肾脏、骨髓等组织器官中。无菌采集

这些器官，用无血清DMEM制成20%组织悬液，以3000r/min离心30min。取上清70℃下处理

5min后加等量10%三氯甲烷室温处理15min，以10000r/min离心20min，取上清用于CIAV分离。

32操作方法

321细胞培养

用含15`'a新生牛血清的DMEM培养基在”℃和5%二氧化碳环境下培养MDCC-M561细胞。每

2d^-3d传代一次细胞长至2X10个/mL5X105个/mL时，用于CIAV分离

3.2.2病料接种

将。.1mL处理好的组织悬液接种MDCC-MSB1细胞，在39℃和5%二氧化碳环境下培养4sh，观

察结果。

3.2.3结果观察

CIAV感染细胞表现为细抱体积增大，随之溶解，若第一次接种未出现纫胞病变，应将细Jit培养物

冻融后盲传三代如仍无细胞病变，则判为CIAV检测阴性。

3.2.4CIAV的鉴定

将出现细胞病变的细胞培养物，按第5章的方法制备细胞涂片，用CIAV标准阳性血清进行鉴定。

4酶联免疫吸附试验

口一1材料准备

一‘I'l试剂