DB31/T 1003-2016 H7N9亚型流感病毒荧光RT-PCR检测方法

ICS11.220

B41

备案号54121—2017

:

上海市地方标准

DB31/T1003—2016

H7N9亚型流感病毒荧光RT-PCR

检测方法

Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionofinfluenza

virussubtypeH7N9

2016-08-22发布2016-12-01实施

上海市质量技术监督局发布

DB31/T1003—2016

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由上海市畜牧兽医办公室提出

。

本标准由上海市畜牧业标准化技术委员会归口

。

本标准起草单位上海市动物疫病预防控制中心

:。

本标准主要起草人刘佩红周锦萍鞠厚斌杨德全王建张维谊刘健葛菲菲李鑫李凯航

:、、、、、、、、、、

杨显超邓波吴秀娟

、、。

Ⅰ

DB31/T1003—2016

H7N9亚型流感病毒荧光RT-PCR

检测方法

1范围

本标准规定了亚型流感病毒的荧光检测方法

H7N9RT-PCR。

本标准适用于禽类及其产品中亚型流感病毒核酸的检测

H7N9。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

基因检验实验室技术要求

SN/T1193

3原理

本方法是根据流感病毒的血凝素基因基因和神经氨酸酶基因基因保守序列分别设

(HA)(NA),

计一对特异性引物和一条特异性的荧光标记探针在反应体系中含有对应的流感病毒基因和或

,HA/

基因的情况下反应得以进行并释放荧光信号利用仪器对过程中相应通道的信号强度

NA,PCR。PCR

进行实时监测和输出实现检测结果的定性分析

,。

4设备和器材

41可检测和荧光的实时荧光仪

.FAMHEXPCR。

42台式冷冻离心机离心速度g以上

.(12000)。

43涡旋混匀器

.。

44精密天平

.(0.001g)。

45冰箱

.(2℃~8℃、-20℃、-70℃)。

46可调移液器及配套带滤芯吸头

.(2μL、10μL、100μL、200μL、1mL)。

47离心管光学反应管

.(1.5mL)、PCR。

5试剂

51除特别说明以外本标准所用的试剂均为分析纯实验室用水符合中二级水要求所

.,,GB/T6682。

有试剂用无酶污染的容器用水处理后高压灭菌分装

RNA(DEPC)。

52引物与探针见表

.A.1。

53

.2×OneStepRT-PCRBufferⅢ。

54

.ExtaqHS(5U/μL)。

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