DB37/T 3997-2020 细菌耐药基因blaNDM常见亚型的环介导等温扩增检测技术

ICS11.220

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T3997—2020

细菌耐药基因blaNDM常见亚型的环介导等温

扩增检测技术

Loop-mediatedisothermalamplificationdetectiontechniqueforcommonsubtypesof

bacterialresistancegeneblaNDM

2020-06-08发布2020-07-08实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T3997—2020

前言

本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准主要起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所、山东润达检测技术有限公司。

本标准主要起草人：齐静、刘玉庆、杜以军、李璐璐、胡明、骆延波、张庆、张印、赵效南、任金

瑞、刘军伟、王怀中、陶海英。

I

DB37/T3997—2020

细菌耐药基因blaNDM常见亚型的环介导等温扩增检测技术

1范围

本标准规定了细菌耐药基因blaNDM常见亚型（blaNDM-1、blaNDM-4、blaNDM-5和blaNDM-9）的环介导等温扩增

LAMP（Loop-MediatedIsothermalAmplification）检测技术的操作步骤。

本标准适用于实验室及临床样本的细菌耐药基因blaNDM常见亚型（blaNDM-1、blaNDM-4、blaNDM-5和blaNDM-9）

的快速可视化检测，其他几个亚型的检测可以参考使用。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T16489水质硫化物的测定亚甲基蓝分光光度法

3试验原理

本标准所应用的试验原理为：根据序列保守区域设计一对外引物、一对内引物和一对环引物特异性

识别靶序列上六个独立区域，在BstDNA聚合酶的作用下引起自循环链置换反应，大量合成目标DNA的同

时伴随有副产物焦磷酸镁白色沉淀产生，可以实现恒温扩增和快速检测，结果通过肉眼即可判定。

4试剂或材料

除非特别规定所用试剂均用分析纯水：符合国标GB/T6682一级水的规定。

4.1BstDNA聚合酶。

4.20.5×TBE缓冲液：配制见附录A.2。

4.32%琼脂糖电泳液：配制见附录A.3。

4.4无毒核酸染料。

4.5DNAMarker2000。

4.6商品化的细菌基因组DNA提取试剂盒。

4.7引物：blaNDM基因几个国内常见亚型的LAMP检测引物如下：

——外引物F3：