DB37/T 2311-2013 牛结核病γ干扰素酶联免疫吸附试验

ICS11.220

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T2311－2013

牛结核病γ干扰素酶联免疫吸附试验

诊断技术

DiagnosticCriteriaonBovineTuberculosisbyEnzyme-linkedImmunoassayof

γ-interferon

2013-04-01发布2013-05-01实施

山东省质量技术监督局发布

DB37/T2311－2013

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出。

本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院奶牛研究中心、中国兽医药品监察所、山东省动物疫病预防与

控制中心。

本标准主要起草人：杨宏军、高运东、丁家波、田夫林、何洪彬、张亮、宋玲玲、侯佩莉、侯明海、

仲跻峰。

I

DB37/T2311－2013

牛结核病γ干扰素酶联免疫吸附试验诊断技术诊断技术

1范围

本标准规定了牛结核病γ干扰素ELISA诊断技术的术语和定义、试剂及仪器、检测方法、结果判定

和操作注意事项等。

本标准所规定的技术适用于牛感染结核分枝杆菌或牛分枝杆菌时γ干扰素的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T18645-2002动物结核病诊断技术

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

牛结核病bovinetuberculosis

由牛分支杆菌（Mycobacteriumbovis）或结核分支杆菌（M.tuberculosis）所引起的一种人畜共

患的慢性消耗性传染病，可通过病畜传染给人和其它动物。

3.2

γ干扰素γ-Interferon

T淋巴细胞受到结核杆菌抗原刺激后释放的细胞因子，作为重要的巨噬细胞活化因子，在对结核分

枝杆菌的免疫应答中发挥重要的作用，可通过γ干扰素的检测来实现对结核杆菌感染的诊断。

4试剂及仪器

4.1试剂

4.1.1血液培养所需材料

血液培养所需材料见附录A。

4.1.2ELISA所需试剂

ELISA所需试剂见附录B。

1

DB37/T2311－2013

4.2仪器

检测所需仪器：

a)37℃培养箱；

b)精密可调移液器（1mL）；

c)1mL、5mL、10mL的移液器；

d)100mL、1L、2L的量筒；

e)6L去离子水或蒸馏水；

f)12道移液器（50µL～300µL）；

g)微量振荡器（可选）；

h)洗板机；

i)酶标仪（含450nm和650nm滤光片）。

5检测方法（γ干扰素ELISA诊断方法）

5.1试剂配制

检测所需试剂及制备方法按附录C的规定。

5.2检测步骤

5.2.1全血培养

5.2.1.1采血

将采集的血液（至少5mL）放入肝素抗凝管中，轻轻颠倒几次混合血液，使肝素溶解，室温（22

±5℃）下运送到实验室并在采血后30h内进行培养，运送和储存过程中切勿冷冻血液。

5.2.1.2血液分装

分装前轻轻颠倒试管，充分混匀血液样品。将抗凝血加入24孔组织培养板，每头动物加三管1.5mL

分装的抗凝血（见表1）。用一次性自动移液器或吸管在无菌条件下进行操作。

表1吸取血液或抗原至24孔培养板的推荐操作

1号动物NILA1AvPPDA2BoPPDA3NILA4AvPPDA5BoPPDA62号动物

3号动物NILB1AvPPDB2BoPPDB3NILB4AvPPDB5BoPPDB64号动物

5号动物NILC1AvPPDC2BoPPDC3NILC4AvPPDC5Bo