DB5306/T 78-2022 半夏组培快繁技术规程

ICS65.020

CCSB05

DB5306

昭通市地方标准

DB5306/T78-2022

半夏组培快繁技术规程

2022-08-19发布2022-09-30实施

昭通市市场监督管理局发布

DB5306/T78-2022

前  言

本文件按照GB/T1.1－2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由昭通市农业科学院提出。

本文件由昭通市农业农村局归口。

本文件起草单位：昭通市农业科学院。

本文件主要起草人：权申春、马永鹏、龙云星、高朝文、王茜、刘元剑、岳凯、宋贤武、李周、岳

万勇、李啟菊。

I

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半夏组培快繁技术规程

1范围

本文件规定了半夏（Pinelliaternata(Thunb.)Breit.）组培快繁技术的术语和定义、生产及技

术流程、炼苗移栽、采收储藏操作规范。

本文件适用于半夏组培苗生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T317白砂糖

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备

GB5749生活饮用水卫生标准

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T22278良好实验室规范原则

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

半夏一步成苗技术

将半夏（Pinelliaternata(Thunb.)Breit.）外植体接种于同一种培养基中，让外植体在其上脱

分化、再分化、长叶、生根，最终形成完整的植株。

3.2

超级原种

用半夏组培苗驯化繁殖产生的第一代繁殖材料（块茎、成熟珠芽、多块茎共生体）。

4半夏组培快繁的生产及技术流程

4.1组织培养生产设施设备

实验室应符合GB19489和GB/T22278要求。常用的实验设备有：超净工作台，高压蒸汽灭菌锅，

电子天平等。

4.2培养基的配制方法

1

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4.2.1培养基配方

半夏组培快繁技术中所用培养基为MS+6-BA+NAA+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH5.8。培养基配方详

细情况见附录A。

4.2.2培养基配制程序

4.2.2.1母液的配制和保存

试剂配制严格按照GB/T603规定方法配制，所用水执行GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

标准。通常将常用试剂配制成比培养基所需浓度高10倍～100倍的母液，具体配制倍数见附录A。母液

置于2℃～4℃的冰箱中贮存。

4.2.2.2植物生长调节剂的配制

植物生长调节剂用量极微量，各种植物生长调节剂单独配制。

4.2.2.2.1NAA的配制

精密称取NAA试剂，先用少量95%乙醇或无水乙醇完全溶解，最后加水定容。常用母液浓度为

0.1mg/ml～1.0mg/ml。

4.2.2.2.26-BA的配制

精密称取6-BA试剂，先用少量1mol/L的HCl完全溶解，最后加水定容。常用母液浓度为0.1mg/ml～

2.0mg/ml。

4.2.2.3培养基制备

半夏培养基由试剂、蔗糖、琼脂、水组成，蔗糖和水应分别符合GB317和GB5749规定。

培养基的制备：称取所需量的琼脂、蔗糖，根据不同浓缩倍数量取对应的母液；首先在水浴锅中加

入琼脂，搅拌让其慢慢熔化；再依次把量取好的母液及生长调剂加入已融化的琼脂中；最后加入蔗糖，

继续加温，不断搅拌，直至琼脂和蔗糖完全溶解；最终定容到所需体积。

4.2.2.4pH值调整

半夏培养基最佳pH值为5.8，采用酸度计或精密pH试纸测定调整，通常用1mol/L的NaOH或1mol/L

的HCl来调节。

4.2.2.5培养基分装

配制好的培养基需趁热分装，分装量以培养容器体积的1/4～1/3为宜，分装后应立即密封。

4.2.2.6培养基灭菌

培养基分装后应在24h内完成灭菌工作。在压力为1.1kg/cm2，温度121℃的条件下，灭菌25min～

30min。

4.2.2.7培养基保存

灭菌后的培养基应保存于洁净、干燥的培养基储存室中，2℃～4℃条件下7d内使用。

2

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4.3外植体的制备及接种

4.3.1外植体的选择

无病虫害、健壮的半夏植株的叶片、珠芽、块茎均可作为外植体，以块茎为外植体更易于取样和操

作。

4.3.2外植体的消毒

用块茎作为外植体时应先剥去表皮，外植体材料应先用自来水冲洗30min。将洗净后的外植体材料

转至超净工作台上，用75%乙醇浸泡10s～20s，用无菌水冲洗2次，再用0.1%升汞消毒8min～12min（块

茎、珠芽消毒12min；叶柄10min，叶片8min），最后用无菌水冲洗5次～7次后备用。

4.3.3接种

在超净工作台上，将消毒好的半夏块茎切成约大小0.5cm×0.5cm，接种到培养基上，带茎尖的块茎

茎尖朝上摆放，切口接触培养基固定；叶柄切成1cm左右大小段扦插到培养基上；叶片切成大小

0.5cm×0.5cm、叶面朝上平铺于培养基上，接种后做好标记。半夏组培技术流程图见附录B。

4.4初代培养

4.4.1温度与光照

半夏最适宜的培养温度25℃±2℃，光照强度为1500Lx～2000Lx，光照时间为12h/d。

4.4.2培养过程

接种好的培养瓶放置在条件适宜的培养架上，培养30d～50d左右，形成愈伤组织和丛生芽。丛