基本信息
发布历史
-
2018年11月
研制信息
- 起草单位:
- 天津市农业质量标准与检测技术研究所、浙江省农业科学院农产品质量标准研究所、天津市东丽区产品质量监督检验所。
- 起草人:
- 兰青阔、陈笑芸、王成、赵新、兰璞、王永、王庆平、汪小福、黄凤军、秦志扬。
- 出版信息:
- 页数:8页 | 字数:- | 开本: -
内容描述
ICS65.020.20
B04
DB12
天津市地方标准
DB12/T843—2018
绿豆源成分检测定性PCR法
Mungbean-derivedingredientsdetection—QualitativePCRmethod
2018-11-07发布2018-12-01实施
天津市市场和质量监督管理委员会发布
DB12/T843—2018
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准由天津市农村工作委员会提出并归口。
本标准起草单位:天津市农业质量标准与检测技术研究所、浙江省农业科学院农产品质量标准研究
所、天津市东丽区产品质量监督检验所。
本标准主要起草人:兰青阔、陈笑芸、王成、赵新、兰璞、王永、王庆平、汪小福、黄凤军、秦志
扬。
I
DB12/T843—2018
绿豆源成分检测定性PCR法
1范围
本标准规定了绿豆源成分的定性PCR检测方法的原理、试剂和材料、仪器、分析步骤、结果分析和
表述、检出限。
本标准适用于绿豆源成分的定性PCR检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
绿豆源成分特异性序列specificsequenceofMungbean-derivedingredients
本标准绿豆源成分特异性序列位于绿豆第5号染色体。
4原理
根据绿豆源特异性序列设计特异性引物,对试样进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期的DNA片段,
判断样品中是否含有绿豆源成分。
5试剂和材料
5.1除非另有说明,仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682规定的一级水。
5.21mol/L氢氧化钠溶液:在160mL水中加入8.0g氢氧化钠(NaOH),溶解后,冷却至室温,再
加水定容到200mL。
5.3CTAB-Abuffer:将4g十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)、16.4g氯化钠(NaCl)、3.15g三羟
甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)、1.5g乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)依次加入到100mL无菌去离
子水中,用1mol/L氢氧化钠溶液(见5.1)调pH至8.0,加水定容至200mL。在103.4kPa(121℃)
条件下灭菌15min。
5.4CTAB-Bbuffer:将1g十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)、0.5g氯化钠(NaCl)、依次加入到100
mL无菌去离子水中,用1mol/L氢氧化钠溶液(见5.1)调pH至8.0,加水定容至200mL。在103.4kPa
(121℃)条件下灭菌15min。
1
DB12/T843—2018
5.51.2mmol/LNaCl溶液:将7g氯化钠(NaCl)溶于100mL无菌去离子水中。在103.4kPa(121℃)
条件下灭菌15min。
5.670%乙醇:将737mL95%乙醇,加水定容至1000mL。
5.7500mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液(pH8.0):称取18.6g乙二胺四乙酸二钠,
加入70mL水中,缓慢滴加氢氧化钠溶液(见5.1)直至EDTA-Na2完全溶解,用氢氧化钠溶液(见5.1)
调pH至8.0,加水定容至100mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。
5.81mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)溶液(pH8.0):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷
溶解于
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