DB1304/T 440-2023 犊牛腹泻病原荧光定量检测技术规程

ICS

DB1304

邯郸市地方标准

DB1304/T440—2023

犊牛腹泻病原荧光定量检测技术规程

2023-08-21发布2023-08-30实施

邯郸市市场监督管理局发布

DB1304/T440—2023

前言

本文件按照GB/T1.1－2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规则起

草。

本文件由河北工程大学提出。

本文件起草单位：河北工程大学、邯郸市标准化所。

本文件主要起草人：王方方、钟翠红、刘冠慧、石博文、张永英、王书秀、杨利、李萌、吴丽丽、

刘辉、何晓玲、袁英、崔濮凡。

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犊牛腹泻病原荧光定量检测技术规程

1范围

本文件规定了双重荧光定量PCR检测犊牛腹泻病原大肠杆菌和微小隐孢子虫的技术要求。

本文件适用于犊牛腹泻病原大肠杆菌和微小隐孢子虫的快速检测和流行病学调查，肉牛和奶牛腹泻

也可参照执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

WS271—2007（感染性腹泻诊断标准）

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

3.1PCR：聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)

3.2RT-qPCR：荧光定量PCR(Real-timequantitativePCR)

3.3PBS：磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferedSaline)

3.4Ct值：循环阈值(CycleThreshold)

3.5DNA：脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid)

3.6Tm值：解链温度(MeltingTemperature)

44样品采集、保存、运输和处理

4.1样品采集

用棉拭子从犊牛直肠采集粪便，或用一次性手套采集新鲜粪便约20g，装入一次性封口袋。每份

样品标记编号、名称、动物来源、动物年龄、采样时间、采集单位或畜主姓名及地址。

4.2样品保存和运输

采集的样品在2℃-8℃条件下保存应不超过72h，长期保存需加入等体积5%重铬酸钾溶液，装入

灭菌容器内4℃保存。样品运输应放在一个不透水、防泄漏的容器内，将上述容器置于结实、不透水和

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防泄漏的辅助包装中。冷冻剂放在辅助包装周围，确保样品在48h内送达实验室。

4.3样品的预处理

4.3.1将经高压灭菌或80℃-100℃烘烤20min的60目-100目铜筛网置于无菌漏斗中，放置在固定好

的铁架台上，漏斗下端置于50mL离心管中。取10g待检样品（