DB35/T 1353-2013 海水养殖鱼类刺激隐核虫病诊断规程

ICS65.150

B51

DB35

福建省地方标准

DB35/T1353—2013

海水养殖鱼类刺激隐核虫病诊断规程

DiagnosticprotocolsforCryptocaryonosisofmarineculturedfish

2013-08-01发布2013-11-01实施

福建省质量技术监督局发布

DB35/T1353—2013

前言

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则编写。

本标准由福建省海洋与渔业厅提出并归口。

本标准负责起草单位：福建省淡水水产研究所、福建省水生动物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人：樊海平、卓玉琛、林煜、吴斌、马平、曾占壮、钟全福、翁祖桐。

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DB35/T1353—2013

海水养殖鱼类刺激隐核虫病诊断规程

1范围

本标准规定了海水养殖鱼类刺激隐核虫病的术语与定义、流行情况与主要症状、样品采集与处理、

形态学及PCR诊断。

本标准适用于海水养殖鱼类刺激隐核虫病的诊断、流行病学调查、检疫与监测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

SC/T7014-2006水生动物检疫实验技术规范

SC/T7103-2008水生动物产地检疫采样技术规范

SC/T7202.2-2007斑节对虾杆状病毒病诊断规程第2部分：PCR检测法

3术语与定义

下列术语与定义适用于本文件。

3.1

刺激隐核虫病Cryptocaryonosis

俗称海水小瓜虫病，海水养殖鱼类受刺激隐核虫（Cryptocaryonirritans）感染，发生病理变化，

出现行为异常或死亡。

4试剂与仪器

4.1试剂与溶液

4.1.1水：GB/T6682，一级。

4.1.2海水：压力为1.05kg/cm2，121.3℃高压蒸汽灭菌15min。

4.1.3生理盐水。

4.1.4固定液：4％甲醛或70％乙醇。

4.1.5引物：

——F1：5'-GTTCCCCTTGAACGAGGAATTC-3'，浓度10µmol/L，-20℃保存；

——R1：5'-TGAGAGAATTAATCATAATTTATAT-3'，浓度10µmol/L，-20℃保存。

4.1.6溶菌酶（100µg/mL）：生化试剂，-20℃保存。

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DB35/T1353—2013

4.1.7蛋白酶K（100µg/mL）、NaCl（3mol/L）、裂解缓冲液、SYBRGreenⅠ工作液按附录A的规

定配制。

4.1.8DNA分子量标准（0.1kb～1.5kb）：生化试剂，-20℃保存。

4.1.9阳性对照：刺激隐核虫DNA模板，-20℃保存。

4.1.10阴性对照：未感染刺激隐核虫的海水鱼类DNA模板，-20℃保存。

4.1.11空白对照：无菌双蒸水为模板。

4.1.12Giemsa染色液：Giemsa干粉1g，甘油（分析纯）66mL，甲醇（分析纯）66mL。将Giemsa

干粉倒入研钵内，加少量甘油，研磨至无颗粒状，将剩余甘油倒入研钵内磨匀，然后装入棕色试瓶中，

56℃温箱中保温2h，再加入甲醇混匀后贮存备用。

4.1.13甘油（分析纯）。

4.1.14除上述试剂与溶液外，其余按SC/T7202.2-2007第5章的规定执行。

4.2仪器与设备

4.2.1光学显微镜、解剖镜和放大镜（30×）。

4.2.2PCR扩增仪：配备25µL和50µL的PCR反应底座。

4.2.3凝胶成像仪：可发射紫外线，携带摄影系统。

4.2.4电泳仪：输出直流电压0V～400V，直流电流1mA～500mA。

4.2.5水平电泳槽：容量250mL～650mL，带凝胶板、样孔梳。

4.2.6台式离心机：配备1.5mL转子，转速16000r/min以上。

4.2.7电动研磨器：转速500r/min～5000r/min。

4.2.8研磨棒：1.05kg/cm2、121.3℃高压蒸汽灭菌15min。

4.2.9离心管：1.5mL，1.05kg/cm2、121.3℃高压蒸汽灭菌15min。

4.2.10PCR反应管：25µL和50µL，1.05kg/cm2、121.3℃高压蒸汽灭菌15min。

4.2.11铜网：孔径500µm（32目）。

4.2.12超声波细胞破碎仪：工作频率0KHz～60KHz。

4.2.13除上述仪器与设备外，其余按SC/T7202.2-2007第6章的规定执行。

5流行情况与主要症状

5.1流行情况

几乎在所有海水养殖鱼类中都可发生，主要危害大黄鱼、卵形鲳鯵、石斑鱼、真鲷、斜带髭鲷和

鮸鱼等，对苗种造成的危害大于成鱼。水温10℃～30℃均可发生，发病时间主要为5月下旬～7月中

旬（水温约为22℃～28℃）和9月中旬～11月下旬（水温约为25℃～19℃）两季。

5.2主要症状

病鱼游动迟缓，对外界刺激反应迟钝，呼吸困难，摄食量减少；病情严重时，病鱼离群于水面缓慢

游动，不摄食。体表、眼角膜、口腔周围和鳃可观察到白点，体表、鳍、