DB15/T 1491-2018 油菜籽(种子)中细菌性黑斑病菌检测方法

ICS65.020.01

B16

备案号：60274-2019

DB15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T1491—2018

油菜籽(种子)中细菌性黑斑病菌检测方法

DetectionmethodsforPseudomonassyringaepv.maculicolainRapeseed(Seeds)

2018-09-30发布2018-12-30实施

内蒙古自治区质量技术监督局发布

DB15/T1491—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由二连浩特出入境检验检疫局技术中心提出。

本标准由内蒙古自治区质量技术监督局归口。

本标准起草单位：中华人民共和国二连浩特出入境检验检疫局技术中心、中华人民共和国南海出入

境检验检疫局技术中心、中华人民共和国满洲里出入境检验检疫局技术中心。

本标准主要起草人：袁淑珍、张永宏、张志峰、李凯兵、刘玮琦、魏宇虹、李菁雯。

I

DB15/T1491—2018

油菜籽(种子)中细菌性黑斑病菌检测方法

1范围

本标准规定了油菜籽(种子)中细菌性黑斑病菌的鉴定、检测结果判定等要求。

本标准适用于油菜籽(种子)中细菌性黑斑病菌的检测方法。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1细菌性黑斑病菌Bacterialblackspot

学名:Pseudomonassyringaepv．Maculicola，简称PSM。

中文名:丁香假单胞杆菌斑生致病变种。

该病菌属于原核生物界Procaryotae，薄壁菌门Gracilicutes，假单胞菌科Pseudomonadaceae。

4病菌的鉴定

4.1PCR初筛

4.1.1样品DNA提取

从油菜籽(种子)样品中取200g用作检测样品。在样品中加入350mL生理盐水，4℃浸泡过夜；纱

布过滤，滤液10000r/min离心15min，1mL灭菌水悬浮沉淀，转入EP管12000r/min离心5min，沉淀

用于提取DNA。用细菌DNA提取试剂盒提取DNA。重复3次。

4.1.2PCR检测

分别取2µL样品DNA，检测hrpZ基因和冠毒素基因，分别进行PCR扩增。用十字花科黑斑病菌标准

菌株DNA作阳性对照，用灭菌蒸馏水作空白对照。

hrpZ基因检测引物MM5F(5'-gaacgagctgaaggaagaca-3')//5R(5'-cagcctggttagtctggtta-3')，预期扩增产物

532bp；冠毒素基因检测引物cflF(5'-ggcgctccctcgcactt-3')//R(5