WS/T 498-2017 细菌性腹泻临床实验室诊断操作指南

ICS11020

C50.

中华人民共和国卫生行业标准

WS/T498—2017

细菌性腹泻临床实验室诊断操作指南

Performanceguidelineforclinicallaboratorydiagnosisofbacterialdiarrhea

2017-01-15发布2017-07-01实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布

WS/T498—2017

目次

前言

…………………………Ⅰ

范围

1………………………1

术语和定义

2………………1

标本采集

3…………………1

粪便标本

3.1……………1

十二指肠结肠造口术或回肠造口术的内容物

3.2、……………………1

直肠拭子

3.3……………2

注意事项

3.4……………2

标本运送

4…………………2

标本接收

5…………………2

标本拒收

6…………………2

实验室检查

7………………3

化验单相关信息

7.1……………………3

标本外观及显微镜下检测

7.2…………3

病原菌的培养及鉴定

7.3………………3

抗血清凝集试验及艰难梭菌毒素检测

7.4……………9

结果报告

7.5……………9

质量控制

7.6……………11

参考文献

……………………14

WS/T498—2017

细菌性腹泻临床实验室诊断操作指南

1范围

本标准规定了粪便等肠道标本临床微生物学检验的技术要求

。

本标准适用于开展粪便等肠道标本细菌培养鉴定和药敏试验的临床实验室

、。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

21

.

腹泻diarrhea

排便次数明显超过平日习惯的频率粪质稀薄水分增加每日排便量超过或含未消化食物

,,,200g,、

脓血或黏液常伴有排便急迫感肛门不适失禁等症状腹泻分急性和慢性两类急性腹泻发病急剧

,、、。,,

病程在周周之内慢性腹泻指病程在个月以上或间歇期在周周内的复发性腹泻

2~3;22~4。

22

.

感染性腹泻infectiousdiarrhea

由细菌病毒真菌或寄生虫感染引起肠道炎症所致的急性或慢性腹泻除霍乱细菌性和阿米巴

、、。、

性痢疾伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻称为狭义上的感染性腹泻为中华人民共和国传染病防治法

、,《》

中规定的丙类传染病

。

23

.

细菌性腹泻bacterialdiarrhea

各种细菌引起的腹泻常见病原菌包括沙门菌属某些种志贺菌属弯曲菌属弧菌属气单胞菌

。、、、、

属耶尔森菌属致病性大肠埃希菌金黄色葡萄球菌和艰难梭菌等

、、、。

24

.

旅游者腹泻travelersdiarrhea

’

旅游者去往其他国家或地区发生的腹泻可由多种病原体引起其检出率依次为沙门菌属某些种

。,、

弧菌属产肠毒素大肠埃希菌志贺菌属及病毒不同地区所发生的旅游者腹泻病原分布也不同有些

、、。,

腹泻至今原因不明

。

3标本采集

31粪便标本

.

病人在干燥清洁便盆避免使用坐式或蹲式马桶内自然排便用无菌竹签挑取大便中异常的部分

(),

有黏液脓液和血液的部分液体粪便取絮状物放入无菌便盒中送检普通

(、)2g~3g;(2mL~3mL),。

细菌培养粪便标本宜放入运送培养基送检

。

32十二指肠结肠造口术或回肠造口术的内容物

.、

用无菌竹签挑取标本中异常的部分有黏液脓液和血液的部分放入无菌便盒中送检

(、)2g~3g。

1

WS/T498—2017

33直肠拭子

.

对于患有腹泻但暂时没有大便产生的患者婴幼儿尤其是监测患有腹泻后溶血性尿毒综合征的婴

、(

幼儿可采用直肠拭子进行检测直肠活检标本和结肠黏膜也可按粪便标本处理对于非免疫缺陷患

),。,

者后者优于前者采集方法用无菌拭子蘸生理盐水湿润由肛门插入约轻轻在直肠内

,。:,6cm~7cm,

旋动取出大便少许将拭子插入运输培养基加盖封口送检

,。

34注意事项

.

341所挑取的粪便不应接触其他部位如便盆粪便样本中不应混入尿液及其他异物采集过程应

..(),,

尽量无菌操作

。

342不应用厕纸收集粪便

..。

343粪便艰难梭菌培养应用无菌带盖塑料管留取量以上尽快送检

..10mL2/3。

344对同一病人在同一天不宜重复送检

..。

345尽可能在抗生素使用之前收集标本

..。

346宜在感染急性期通常是内采集标本

..(5d~7d)。

347下列腹泻患者应连续送检标本

..3d:

社区获得性腹泻入院前或内出现症状

———(72h)。

医院腹泻入院后出现症状且至少有下列情况之一大于岁并伴有内科疾病

———(72h),:65、HIV

感染粒缺中性粒细胞9及疑似院内暴发

、(<0.5×10/mL)。

怀疑肠道感染的非腹泻性表现

———。

348肠炎和发热病人建议做血培养

..。

349伤寒沙门菌感染时骨髓培养检出高于血培养

..。

4标本运送

如新鲜粪便不是通过运输培养基送检标本应在采集后尽快送检不应超过若新鲜粪便是通

,,2h;

过运输培养基送检标本可在冰箱保存用于艰难梭菌培养的标本除外内送到实验室常

,4℃(),24h。

用的运输培养基为改良的培养基适用于保护大多数细菌性病原体和甘油磷酸盐缓冲液

Cary-Blair()

不适用于弧菌属和弯曲菌属

()。

标本标识要求有唯一标识号或条码

。

5标本接收

收到合格标本后要立即培养处理

。

6标本拒收

干燥的拭子含钡粪便黄软成形便干便明显污染的粪便一日内重复送检的标本及以寄生虫检

、、、、、

测用运输培养基含固定液送检的标本不做实验室相关检测应设法与临床医师联系可要求重新留取

(),,

标本并做好记录在没有与医师沟通之前标本不应丢弃仍按实验室标本保存原则存放

,,,。

若采集后未使用运输培养基运送以运输培养基送检但保存超过或保存超过

2h、4℃48h35℃

2

WS/T498—2017

的标本不能送检应在报告单上标记样本运送延迟培养可能出现假阴性

24h,“,”。

7实验室检查

71化验单相关信息

.

临床医师应在化验单中标明疑似何种腹泻如疑似霍乱及检测何种细菌如霍乱弧菌以便实验

()(),

室技术人员依据临床信息选择合适的培养基和培养方法

。

72标本外观及显微镜下检测

.

721外观检测

..

描述粪便标本的性状有无黏液脓性血性及水样等

,、、。

722生理盐水湿片镜下检测

..

观察是否有中性粒细胞红细胞及其数量是否有酵母样真菌大量繁殖是否有真菌丝和假菌丝细

、;,;

菌动力特征用暗视野显微镜观察等常见腹泻粪便标本的生理盐水湿片显微镜检查结果见表

()。1。

表1常见腹泻粪便标本的生理盐水湿片显微镜检查结果

微生物或毒素其他特征中性粒细胞红细胞

弯曲菌属投镖式或螺旋式运动有有

艰难梭菌毒素黏膜样便有有

大肠埃希菌肠出血性大肠埃希菌水样便无有

O157:H7,

肠侵袭性大肠埃希菌黏膜样便有有

产肠毒素大肠埃希菌水样便无无

沙门菌属运动的杆菌少有

志贺菌属无动力的杆菌有有

霍乱弧菌流行状或穿梭样运动无无

葡萄球菌毒素无无

—

注表格内容仅供参考任何腹泻粪便标本的镜检结果都是可变的

:,。

73病原菌的培养及鉴定

.

731培养基

..

分离培养基的选择应依据病人的临床特征而定用特殊的选择性培养基检测是否发酵乳糖及是否

。

产生硫化氢来筛检沙门菌属和志贺菌属见表用于培养和筛选其他特殊病原体的培养基见表

2;3。

3

WS/T498—2017

表2常用分离沙门菌属和志贺菌属的初代培养基和传代肉汤增菌培养基

培养基培养基类型分离株乳糖发酵反应菌落特征备注

麦康凯琼脂选择性培革兰阴性肠道

粉色无色或透明琼脂将阻止变形杆菌属扩散

养基细菌5%

(MAC)

选择性培革兰阴性肠道

中国蓝琼脂粉色无色或透明琼脂将阻止变形杆菌属扩散

养基细菌5%

志贺菌属呈绿

柠檬酸菌被抑制若出现则呈

沙门菌属和志贺色沙门菌属呈,,

琼脂选择性培;蓝绿色小菌落变形杆菌属和普

HE菌属特别是志橘黄色橙粉色蓝色或绿色可;

养基(、,罗维登斯菌属呈黄色或绿色可

(HEK)贺菌属有黑色中心检;

),有黑色中心检测硫化氢

测硫化氢,

沙门菌属和志贺无色或透明可

沙门志贺琼高度选择性;

菌属宋内志贺粉色红色有黑色中心检

脂培养基(、,—

(SS)菌被抑制测硫化氢

)

沙门菌属和志贺无色或透明可

琼脂高度选择性;

XLD菌属宋内志贺粉色红色有黑色中心检

培养基培养基(、,—

菌被抑制测硫化氢

)

革兰阴性杆志贺菌属和沙门

志贺菌属和沙门

菌肉增菌培养基菌属最先大量次代培养b

(GN)菌属—6h~8h

汤培养基a增菌

次代培养

亚硒酸盐对大肠

亚硒酸盐煌沙门菌属和志贺b亚硒酸盐液体培养

增菌培养基埃希菌和其他肠18h~24h;

绿肉汤a菌属—基中的胱氨酸可抑制沙门菌属

道细菌有毒性

某些种

注在没有特别说明的情况下培养条件为空气环境孵育

:,35℃~37℃24h。

a肉汤和亚硒酸盐煌绿肉汤培养基为非常规使用建议当检测少量沙门菌属和志贺菌属时