GA/T 1604-2019 法庭科学 生物检材中地西泮等23种药物检验 快速溶剂萃取气相色谱-质谱法

ICS13.310

A92GA

中华人民共和国公共安全行业标准

GA/T××××－××××

法庭科学生物检材中地西泮等23种药物

检验快速溶剂萃取气相色谱-质谱法

Forensicsciences—Examinationmethodsfor23sedative-hypnoticsincluding

diazepaminbiologicalsamples—AcceleratedsolventextractionGC-MS

××××-××-××发布××××-××-××实施

中华人民共和国公安部发布

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前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC179/SC1）提出并归口。

本标准起草单位：杭州市公安局刑事科学技术研究所。

本标准主要起草人：应剑波、李晓飞、罗永此、唐磊、田国刚、程建波、卓晓聪、于海群。

I

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法庭科学生物检材中地西泮等23种药物检验

快速溶剂萃取气相色谱-串联质谱方法

1范围

本标准规定了法庭科学生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中地西泮等23种药物的快速

溶剂萃取气相色谱-串联质谱（ASE-GC-MS/MS）定性定量检验方法。

本标准适用于法庭科学生物检材中23种药物的定性分析和定量分析。其他可疑样品中地西泮等23

种药物的定性分析和定量分析可参照使用。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GA/T122毒物分析名词术语

3术语和定义

GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。

4原理

以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，用快速溶剂萃取仪（ASE）对生物检材进行提

取、净化及浓缩，采用气相色谱－串联质谱法进行定性定量，以保留时间、一级质谱或二级质谱的特征

离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，用外标法计算样品中药物的含量。

5试剂和仪器

5.1试剂

实验用水应符合GB/T6682中规定的三级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为色谱纯，试

剂包括：

a)环己烷；

b)乙酸乙酯；

c)丙酮；

d)二氯甲烷；

e)甲醇；

f)无水硫酸钠（分析纯）；

g)pH值10.0缓冲液：

1)0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠0.4g，用水溶解并稀释至100mL；

2)0.4mol/L硼酸溶液：称取硼酸2.44g，用水溶解并稀释至100mL；

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3)0.4mol/L氯化钾溶液：称取氯化钾2.98g，用水溶解并稀释至100mL；

4)量取0.1mol/L的氢氧化钠溶液43.7mL，加入0.4mol/L的硼酸溶液12.5mL，再加入0.4

mol/L的氯化钾溶液12.5mL，混合均匀，得到pH值10.0缓冲液；

h)pH值6.0缓冲液：称取磷酸二氢钠6.0g，用去离子水450mL溶解，混匀，用1.0mol/L氢氧化

钠溶液调pH值至6.0，用水定容至500mL；

i)标准溶液：

1)1.0mg/mL标准物质溶液：根据地西泮等23种标准物质（23种药物的基本信息参见附录A）

的纯度和盐型换算后，各称取适量，分别用甲醇配制1.0mg/mL的标准储物质溶液，置于

冰箱中冷藏保存。有效期12个月。或采用市售标准溶液；

2)20.0µg/mL混合标准工作溶液：移取1.0mg/mL的标准储备液各1.0mL，用甲醇稀释并

定容至50mL混匀，配制成浓度为20.0µg/mL的混合标准工作溶液，置于冰箱中冷藏保

存。有效期6个月。实验中所用其他浓度的混合标准工作溶液均由1.0mg/mL标准物质溶

液用甲醇稀释得到。

注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。

5.2材料

材料包括：

a)颗粒状硅藻土；

b)中性三氧化二铝：（100～200）目，使用前在130℃下活化3h，冷却后按6%比例加水搅拌均匀，

装入原瓶，平衡24h后备用；

c)硅镁吸附剂：（80～100）目，使用前在130℃下活化20h，冷却后按4%比例加水搅拌均匀，装

入原瓶，平衡24h后备用；

d)具盖离心管；

e)pH试纸：范围1～14。

6仪器和设备

仪器和设备包括：

a)气相色谱-串联质谱仪：配有电子轰击源（EI）和三重四极杆质量分析器；

b)快速溶剂萃取仪；

c)凝胶色谱净化浓缩联用仪；

d)离心机；

e)移液器；

f)电子天平；

g)浓缩器。

7操作方法

7.1定性分析

7.1.1样品提取

7.1.1.1快速溶剂萃取

移取血液等液体检材样品1.0mL～3.0mL，或称取铰碎（或匀浆）的肝脏等固体检材样品1.0g～3.0g，

加入pH值6.0的缓冲液0.5mL，混匀，再加入5g的硅藻土搅拌均匀后，倒入底部装有5g中性三氧化二铝

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或硅镁吸附剂的萃取池中，按照7.1.2.1.1条件进行操作。萃取完毕后，转移萃取液至试管中，高速离心

后取出有机相，按7.1.2.1.2的条件用凝胶色谱净化浓缩联用仪浓缩至0.5mL供分析，或置于浓缩器上在

温度40℃浓缩至干，残留物用甲醇0.5mL溶解，作为检材样品提取液供仪器分析。

7.1.1.2质控样品的制备

取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份，一份作为空白样品，一

份添加地西泮等23种物质，作为添加样品（添加样品浓度为0.1µg/mL），与检材样品平行操作，得到空

白样品提取液和添加样品提取液供仪器分析。

7.1.2仪器检测

7.1.2.1仪器条件

7.1.2.1.1快速溶剂萃取条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：

a)系统压力：10MPa；

b)萃取池温度：110℃；

c)静态萃取时间：6min；

d)静态萃取次数：2次；

e)溶剂冲洗体积：萃取池体积的60%；

f)氮气吹扫时间：100s；

g)萃取溶剂：乙酸乙酯/环己烷/丙酮（体积比2∶2∶1）混合溶剂或二氯甲烷/环己烷/丙酮（体积

比1∶1∶1）混合溶剂。

7.1.2.1.2凝胶色谱净化浓缩联用仪条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：

a)净化柱：20mm×300mm，填料50.0g中性多孔的交联苯乙烯二乙烯基苯聚合物或类似物；

b)流动相：环己烷/乙酸乙酯（体积比1:1）混合溶剂；

c)流速：4.70mL/min；

d)收集时间：收集500s～1400s的洗脱液；

e)浓缩腔温度：40℃。

7.1.2.1.3气相色谱-串联质谱条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：

a)色谱柱：VF-5MS弹性石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）或其他等效柱；

注：VF-5MS柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品

的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

b)色谱柱温程：100℃保持1min，以20℃/min速率升至280℃，保持15min；

c)进样口温度：280℃；

d)载气：高纯氦气；

e)载气流量：1.0mL/min，恒流；

f)进样方式：分流进样，分流比10：1；

g)进样体积：1µL；

h)传输线温度：280℃；

i)离子源温度：230℃；

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j)扫描方式：SCAN；

k)扫描范围：45amu～450amu；

l)EI源轰击能量：70eV；

m)EDR电压：1300V；

n)碰撞气：高纯氩气，压力为1.8mtorr；

o)离子化方式：EI+；

p)检测方式：多反应离子监测（MRM）；

q)MS/MS质谱条件（定性离子对、定量离子对、碰撞能量）：见表1。

表1MS/MS质谱条件

碰撞能量

名称定性离子对定量离子对

eV

141＞8015

巴比妥156＞141

156＞14110

141＞8015

异戊巴比妥156＞141

156＞14110

141＞8015

戊巴比妥156＞141

156＞14110

167＞12410

司可巴比妥168＞153

168＞15310

204＞16110

苯巴比妥204＞161

204＞11525

167＞13930

扑尔敏203＞167

203＞16725

234＞21735

丙咪嗪234＞217

280＞23510

284＞7210

异丙嗪284＞72

284＞2135