GA/T 1605-2019 法庭科学 生物检材中丁丙诺啡检验 液相色谱-质谱法

ICS13.310

A92GA

中华人民共和国公共安全行业标准

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法庭科学生物检材中丁丙诺啡检验

液相色谱-质谱法

Forensicsciences—Examinationmethodsforbuprenorphineinbiological

samples—LC-MS

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中华人民共和国公安部发布

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前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会(SAC/TC179/SC1)提出并归口。

本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、山西医科大学法医学院。

本标准主要起草人：王瑞花、董颖、栾玉静、杜鸿雁、任昕昕、王爱华、宋歌、董林沛、蔚志文。

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法庭科学生物检材中丁丙诺啡检验液相色谱-质谱法

1范围

本标准规定了法庭科学生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中丁丙诺啡的液相色谱-质谱

（LC-MS）定性定量检验方法。

本标准适用于法庭科学生物检材中丁丙诺啡的定性分析和定量分析。其他可疑样品中丁丙诺啡的定

性分析和定量分析可参照使用。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GA/T122毒物分析名词术语

3术语和定义

GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。

4原理

以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用液相

色谱-质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和离子丰度比作为定性判断依据；以峰面积

为依据，采用外标法进行定量分析。

5试剂和材料

5.1试剂

实验用水应符合GB/T6682中规定的一级水，除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试

剂包括：

a)甲醇（色谱纯）；

b)乙腈（色谱纯）；

c)氨水；

d)盐酸；

e)5%氨水/乙腈溶液：量取5mL氨水，加乙腈稀释至100mL；

f)0.1mol/L盐酸：量取8.4mL浓盐酸，加水稀释至1000mL；

g)5mmol/L乙酸铵溶液（pH值9.0）：称取乙酸铵0.38g，加水溶解并稀释至1000mL，用氨水

调至pH值为9.0；

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h)5mmol/L甲酸铵溶液（pH值3.5）：称取甲酸铵0.32g，加水溶解稀释至1000mL，用甲酸调

pH值为3.5；

i)标准溶液：

1）1.0mg/mL标准物质溶液：根据丁丙诺啡标准物质纯度和盐型换算后，称取适量，用甲醇

配制1.0mg/mL丁丙诺啡标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期6个月。或采用

市售标准溶液；

2）10.0µg/mL标准工作溶液：移取1.0mg/mL标准物质溶液0.1mL，用甲醇稀释至10mL，

混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期3个月。实验中所用其他浓度的标准工作溶

液均由1.0mg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得到。

注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。

5.2材料

材料包括：

a)固相萃取柱：混合型阳离子交换（MCX）固相萃取柱或等效固相萃取柱，使用前依次用甲醇、

水活化；

b)一次性注射器；

c)具盖离心管；

d)有机系微孔滤膜：0.22µm。

6仪器和设备

仪器和设备包括：

a)液相色谱-质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆或离子阱质量分析器；

b)离心机；

c)振荡器；

d)电子天平；

e)移液器。

7操作方法

7.1定性分析

7.1.1样品提取

7.1.1.1沉淀蛋白

移取血液等液体检材样品0.5mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品0.5g于具盖离心管中。加入乙

腈2mL，振荡10min，8000r/min离心20min，取上清液，经有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，

供仪器分析。

7.1.1.2固相萃取

移取血液等液体检材样品1.0mL～2.0mL，或称取绞碎的肝脏等固体检材样品1.0g～2.0g于具盖离心

管中，用4倍体积0.1mol/L的盐酸稀释，振荡10min，8000r/min离心20min，取上清液转移至已活化好的

MCX固相萃取柱中，控制上清液过柱流速为0.5mL/min，依次用0.1mol/L盐酸1mL、甲醇1mL、乙腈1mL

淋洗，抽干弃去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱2min，用1mL5%的氨水/甲醇溶液洗脱，

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收集洗脱液置于浓缩器上45℃浓缩至干，残留物用甲醇200L溶解，用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤，

作为检材样品提取液，供仪器分析。

7.1.1.3质控样品制备

取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作

为空白样品，一份添加丁丙诺啡标准物质，作为添加样品（添加样品的浓度为20ng/mL），与检材样品

平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。

7.1.2仪器检测

7.1.2.1仪器条件

7.1.2.1.1液相色谱-质谱（离子阱质量分析器）条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品实际情况进行调整：

a)色谱柱：XTerraRP18色谱柱（2.1mm×150mm，3.5µm），或其他等效反相液相色谱柱；

注：XTerra®RP18是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产

品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

b)柱温：30℃；

c)流动相：80%乙腈:20%5mmoL/L乙酸铵溶液（氨水调节pH至9.0）；

d)流速：0.2mL/min；

e)进样体积：10µL；

f)离子源：电喷雾电离（ESI）；

+

g)扫描方式：正离子检测，采用二级全扫，母离子[M+H]=468.3，定量子离子m/z=414.2；

h)源电压：4.5kV；

i)加热毛细管温度：280℃；

j)鞘气（氮气）流量：38arb，辅助气（氮气）流量：5arb；

k)碰撞能：34％。

7.1.2.1.2液相色谱-质谱（三重四级杆质量分析器）条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：

a)色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18柱，(2.1mm×100mm,1.7µm)或其他等效色谱柱；

注：ACQUITYUPLCBEHC18是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表

示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

b)流动相：A：乙腈，B：5mmol/L甲酸铵溶液（pH值3.5）；

c)梯度洗脱程序：见表1；

表1梯度洗脱条件

时间

AB

min

10%90%

1.590%