GA/T 1619-2019 法庭科学 生物检材中灭多威和灭多威肟检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法

ICS13.310

A92GA

中华人民共和国公共安全行业标准

GA/T××××－××××

法庭科学生物检材中灭多威和灭多威肟

检验气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法

Forensicsciences—Examinationmethodsformethomylandmethomyloxime

inbiologicalsamples—GC-MSandLC-MS

××××-××-××发布××××-××-××实施

中华人民共和国公安部发布

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前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC179/SC1）提出并归口。

本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、运城市公安局。

本标准主要起草人：王瑞花、张云峰、常靖、任昕昕、王爱华、刘彦军。

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法庭科学生物检材中灭多威和灭多威肟检验

气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法

1范围

本标准规定了生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中灭多威及灭多威肟的气相色谱-质谱

（GC-MS）定性检验方法和液相色谱-质谱（LC-MS）定性定量检验方法。

本标准适用于生物检材中灭多威和灭多威肟的定性分析和定量分析。其他可疑样品中灭多威及灭多

威肟的定性分析和定量分析可参照使用。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GA/T122毒物分析名词术语

3术语和定义

GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。

4原理

以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用气相

色谱-质谱法定性，液相色谱-串联质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作

为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。

5试剂和材料

5.1试剂

气相色谱-质谱实验用水应符合GB/T6682中规定的三级水，液相色谱-串联质谱实验用水应符合

GB/T6682中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括：

a)甲醇；

b)乙酸乙酯；

c)二氯甲烷；

d)中性氧化铝或硅镁吸附剂；

e)乙腈（色谱纯）；

f)丙酮；

g)甲酸（色谱纯）；

h)无水硫酸钠；

i)标准溶液：

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1)1.0mg/mL标准物质溶液：根据灭多威和灭多威肟标准物质的纯度，各称取适量，分别用

甲醇配制1.0mg/mL灭多威和灭多威肟标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期6个

月。或采用市售标准溶液；

2)0.1mg/mL混合标准工作溶液：移取1.0mg/mL的灭多威和灭多威肟标准物质溶液各1.0mL，

用甲醇定容至10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期3个月。实验中所用其

他浓度的混合标准工作溶液均由0.1mg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得到；

3)10.0µg/mL灭多威和灭多威肟单一标准工作溶液：移取1.0mg/mL的灭多威和灭多威肟标

准物质溶液各0.1mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，配制成浓度为10.0µg/mL

的单一标准工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期1个月。实验中所用其他浓度

的单一标准工作溶液均由10.0µg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得到。

注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。

5.2材料

材料包括：

a)具盖离心管；

b)具塞玻璃试管；

c)固相萃取柱：Oasis®HLB柱或等效固相萃取柱，依次用甲醇、水活化；

注：Oasis®HLB柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产

品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

d)一次性注射器；

e)有机系微孔滤膜：0.22µm。

6仪器和设备

仪器和设备包括：

a)气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）；

b)液相色谱-质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆质量分析器；

c)电子天平；

d)离心机；

e)振荡器；

f)移液器；

g)浓缩器。

7操作方法

7.1定性分析

7.1.1样品提取

7.1.1.1液液萃取

移取血液等液体检材样品1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g～2.0g于具盖离心

管中，加入乙酸乙酯4.0mL～8.0mL，振荡5min，8000r/min离心10min，分离有机相；重复提取一次，

合并两次提取的有机相，用无水硫酸钠脱水后，置于浓缩器上45℃浓缩至干，残留物用甲醇200L溶解，

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作为检材样品提取液供GC-MS分析或用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤，供LC-MS分析。如需净化，按

7.1.1.4操作。

7.1.1.2丙酮/水混合溶剂提取

移取血液等液体检材样品5.0mL～10.0mL，或称取铰碎的固体检材样品5.0g～10.0g，用丙酮/水混

合溶剂（体积比4:1）50mL～100mL浸泡3h以上（或超声1h以上）。8000r/min离心10min，分离上清液，

置于水浴锅上50℃浓缩至2mL左右，离心，取上清液移至离心管中，再加入乙酸乙酯6.0mL，振荡10min，

8000r/min离心10min，分离有机相，重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上45℃浓缩至

干，残留物用甲醇200L溶解，作为检材样品提取液供GC-MS分析或用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤，

供LC-MS分析。如需净化，按7.1.1.4操作。

7.1.1.3固相萃取

移取血液等液体检材样品1.0mL～2.0mL，或称取绞碎的肝脏等固体检材样品1.0g～2.0g于具盖离心

管中，用4倍体积水稀释，振荡10min，8000r/min离心20min，取上清液转移至已活化好的C18固相萃取

柱中，控制上清液过柱流速为0.5mL/min过柱，依次用1mL水、1mL甲醇/水(体积比5:95)淋洗，抽干弃

去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱2min，用2mL乙酸乙酯或乙酸乙酯/二氯甲烷（体积比

1:1）洗脱，控制流速为0.5mL/min，收集洗脱液并置于浓缩器上45℃浓缩至干，残留物用甲醇200L溶

解，作为检材样品提取液供GC-MS分析或用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤，供LC-MS分析。如需净化，

按7.1.1.4操作。

7.1.1.4样品净化（中性氧化铝柱净化法）

净化过程包括：

a)装柱：少许脱脂棉，依次加入无水硫酸钠1g～2g、中性氧化铝2g～5g或硅镁吸附剂、无水硫

酸钠2g～3g；

b)净化：用与提取液相同的溶剂6.0mL预淋洗装好的柱子，弃去预淋液，将检材样品提取液过

柱，再用与提取液相同的溶剂6.0mL洗脱。收集合并过柱液及洗脱液，置于浓缩器上45℃浓

缩至干，用200µL甲醇溶解，供GC-MS分析或用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤，供LC-MS

分析。

7.1.1.5质控样品制备

取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作

为空白样品，一份添加灭多威或灭多威肟标准物质，作为添加样品（GC-MS添加样品的浓度为

1.0µg/mL(g)，LC-MS添加样品的浓度为20ng/mL(g)），与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和

添加样品提取液供仪器检测。

7.1.2仪器检测

7.1.2.1仪器条件

7.1.2.1.1气相色谱-质谱条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：

a)色谱柱：HP-5柱（30m×0.25mm，0.25µm）或等效色谱柱；

注：HP-5柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认

可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

b)色谱柱温程：100℃保持2min，以30℃/min速率升至280℃，保持17.5min；

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c)柱流速：1mL/min；

d)进样口温度：280℃；

e)传输线温度：230℃；

f)离子源温度：230℃；

g)电子轰击能量：70eV；

h)载气：高纯氦；

i)进样方式：分流进样，分流比：10:1；

j)扫描方式：全扫描（SCAN），质量扫描范围40amu~450amu；

k)灭多威和灭多威肟（灭多威分解产物）的保留时间、特征离子见表1。

表1灭多威和灭多威肟的保留时间及定性离子

保留时间

化合物定性离子

min

灭多威3.5758,88,105,162

灭多威肟4.4758,88,105

7.1.2.1.2液相色谱-质谱条件

以下为参考条件，可根据不