DB15/T 1849-2020 动物垫料中大肠菌群检测

ICS07.100.99

B41

DB15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T1849—2020

动物垫料中大肠菌群检测

Detectionforcoliformsinanimalbedding

2020-02-25发布2020-03-25实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T1849—2020

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由中华人民共和国呼和浩特海关提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国呼和浩特海关、鄂尔多斯市动物疫病预防控制中心、内蒙古自治

区农牧业科学院。

本标准主要起草人：赵治国、延涵、崔强、王海艳、于志超、陈林军、敖威华、张晓东、盛万里、

罗晓平、李军燕。

I

DB15/T1849—2020

动物垫料中大肠菌群检测

1范围

本标准规定了动物垫料中大肠菌群MPN计数法和平板计数法。

本标准适用于动物垫料中大肠菌群的定量检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定

SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则

SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

动物垫料animalbedding

用于吸收动物排泄物，使动物保持舒适生活环境的铺垫物。也包括动物笼内非直接与动物机体接触

的铺垫物。

3.2

大肠菌群coliforms

培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的一群革兰氏阴性无芽胞杆菌。

3.3

最可能数mostprobablenumber(MPN)

泊松分布的一种间接计数方法。

3.4

菌落形成单位colonyformingunit（CFU）

在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的每一个菌落，是计算细菌或霉菌数目的单位。

1

DB15/T1849—2020

4检验原理

4.1MPN计数法

MPN计数法是统计学和微生物学相结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后，根据其

未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。

4.2平板计数法

大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带

有沉淀环的菌落。

5仪器和设备

5.1恒温培养箱：36℃±1℃。

5.2冰箱：2℃～5℃。

5.3恒温水浴箱：46℃±1℃。

5.4天平：感量0.1g，0.0001g。

5.5均质器。

5.6漩涡混合器。

5.7高压灭菌器。

5.8菌落计数器。

5.9无菌试管：18mm×180mm。

5.10无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。

5.11无菌滤膜均质袋。

5.12无菌锥形瓶：500mL。

5.13无菌量筒。

5.14无菌规格板：5cm×5cm。

5.15无菌培养皿：15mm×90mm。

5.16无菌棉签。

5.17无菌镊子。

5.18无菌剪刀。

5.19无菌勺。

5.20pH计或pH比色管或精密pH试纸。

6培养基和试剂

6.1实验用水：符合GB/T6682的要求。

6.2月桂基硫酸盐胰蛋白胨(laurylsulfatetryptose，LST)肉汤：见附录A.2。

6.3煌绿乳糖胆盐(brilliantgreenlactosebile，BGLB)肉汤：见附录A.3。

6.4结晶紫中性红胆盐琼脂(violetredbileagar，VRBA)：见附录A.4。

6.5无菌磷酸盐缓冲液：见附录A.5。

6.6无菌生理盐水：见附录A.6。

6.7NaOH溶液（1mol/L）：见附录A.7。

2

DB15/T1849—2020

6.8HCL溶液（1mol/L）：见附录A.8。

7MPN计数法

7.1采样

7.1.1采样原则

样品采集应遵循随机性、代表性的原则。采样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。

7.1.2颗粒状或粉末样品

对送检样品包装内不同部位样品进行随机多点取样至少250g，充分混匀后称取25g颗粒状或粉末

状垫料样品，加入225mL无菌稀释液（磷酸盐缓冲液或生理盐水），充分振摇或均质1min～2min，制

成1:10的样品匀液。

7.1.3平面样品

无菌操作将灭菌规格板（5cm×5cm）放在平面垫料表面，用浸有无菌稀释液（磷酸缓冲液或生理

盐水）的棉拭子，在规格板内来回均匀涂抹整个方格3次，并随之转动棉拭子，然后用灭菌剪刀剪去棉

拭子与手接触的部分，将棉拭子头置入装有25mL无菌稀释液的无菌锥形瓶中，根据样品面积大小重复

采样1～4个规格板面积，采样量见表1，相应地将棉拭子头置入25mL～100mL的无菌稀释液中，充分振

摇制成样品原液（1mL原液对应的样品面积为1cm2）。取1mL样品原液注入含有9mL无菌稀释液的试

管中，制成1:10的样品匀液。

表1不同面积平面类垫料样品采样量

样品面积采样量

规格板数

m2cm2

小于0.25（含）251

0.25～0.5（含）502

0.5～0.75（含）753

大于0.751004

7.2稀释

7.2.1样品匀液的pH应在6.5～7.5之间，必要时用1mol/LNa