GA/T 383-2014 法庭科学DNA实验室检验规范

ICS13.310

A92

中华人民共和国公共安全行业标准

/—

GAT3832014

代替/—

GAT3832002

法庭科学DNA实验室检验规范

SecificationsforexaminationofforensicDNAlaborator

py

ㅤㅤㅤㅤ

2014-05-09发布2014-05-09实施

中华人民共和国公安部发布

/—

GAT3832014

法庭科学DNA实验室检验规范

1范围

本标准规定了法庭科学DNA实验室检验应遵守的基本要求。

本标准适用于所有从事法庭科学检验的DNA实验室。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/—检测和校准实验室能力的通用要求

GBT270252008

—人血红蛋白检测金标试剂条法

GA7652008

—人精液检测金标试剂条法

GA7662008PSA

3术语与定义

下列术语和定义适用于本文件。

ㅤㅤㅤㅤ

3.1

前期检验riorexamination

p

DNA检验前进行的预试验和确证试验。

3.2

DNA提取DNAextraction

将DNA分子从其蛋白及其他细胞物质成分中分离提纯的过程和方法。

3.3

遗传标记eneticmarker

g

,。

由遗传决定并能够以一定的规律从亲代传给子代的生物学特征

3.4

聚合酶链反应;

olmerasechainreactionPCR

py

一个酶促的特定DNA片段体外扩增过程。

4前期检验

4.1血痕检验

4.1.1预检验

4.1.1.1联苯胺试验

4.1.1.1.1试剂

联苯胺试剂配方如下:

1

/—

GAT3832014

)联苯胺无水乙醇饱和液;

a

)过氧化氢溶液;

b3%

)冰醋酸。

c

配制方法见附录B。

4.1.1.1.2方法

,、、,

取滤纸轻轻擦拭斑迹分别加冰醋酸联苯胺无水乙醇饱和液3%过氧化氢溶液立即出现翠蓝色

为阳性反应。

4.1.1.2鲁米诺检验

4.1.1.2.1试剂

鲁米诺试剂配方为:

a)鲁米诺粉末;

b)过氧化氢粉末。

4.1.1.2.2方法

,,

按1∶5比例分别将鲁米诺粉末0.1g与过氧化氢粉末0.5g置喷壶中加入100mL~200mL蒸

,,。

馏水混合喷洒斑迹立即出现蓝色荧光为阳性反应

4.1.2确证检验———金标试纸检验法

4.1.2.1试剂

ㅤㅤㅤㅤ

确证检验主要试剂如下:

a)人血红蛋白检测金标试纸条;

b)纯水。

4.1.2.2方法

见—。

GA7652008

4.2精斑检验

4.2.1确证检验———精子检出法

4.2.1.1试剂

确证检验主要试剂如下:

)酸性复红溶液;

a1%

)美蓝溶液;

b1%

)盐酸;

c1%

d)生理盐水。

4.2.1.2方法

,,

取少量可疑斑迹用适量生理盐水浸泡后离心取沉渣涂于载玻片上干燥后分别用1%酸性复红溶

,,。,。

液和美蓝溶液染色盐酸和清水洗涤干燥后镜检精子头部被染成红色而尾部被染成蓝色

1%1%

2

/—

GAT3832014

4.2.2确证检验———金标试纸检验法

4.2.2.1试剂

确证检验主要试剂如下:

a)人前列腺特异性抗原检测金标试纸条;

b)纯水。

4.2.2.2方法

见—。

GA7662008

5DNA提取与纯化

详见附录A。

5.1有机溶剂法

,

通过酚氯仿混合物萃取溶液中的蛋白质类有机物质保留于水相溶液中的提取

-DNADNADNA

方法。

5.2聚苯乙烯二乙烯基苯树脂法

、,。

通过Chelex螯合镁钠和钾等离子使降解DNA的核酸酶失去活性的DNA提取方法

ㅤㅤㅤㅤ

5.3硅珠法

,

在高浓度的硫氰酸胍存在的条件下通过二氧化硅微粒特异捕获有机质溶液中DNA分子的DNA

提取方法。

5.4磁珠法

,,

在胍盐存在条件下通过在硅胶外表涂上一层磁性树脂的磁珠特异性的吸附细胞裂解液裂解后释

放出的提取与纯化方法。

DNADNA

5.5十六烷基三甲基溴化胺法

,,

通过非离子型去污剂CTAB破坏细胞壁和细胞膜及硬组织并与DNA形成复合物分离DNA与

蛋白质及多糖类物质的DNA提取方法。

5.6硅胶膜吸附法

,、、

通过硅胶膜吸附细胞裂解液裂解后释放出DNA并经蛋白酶消化漂洗液清洗除去蛋白质脂质以

及多糖等杂质的DNA提取与纯化方法。

5.7FTA卡法

,、。

通过FTA卡裂解细胞释放DNA从血液口腔上皮细胞中获得DNA的方法

5.8全自动工作站法

、。

采用全自动工作站结合上述提取纯化方法进行DNA提取和纯化的方法

3

/—

GAT3832014

5.9乙醇沉淀纯化法

,。

通过乙醇沉淀去盐纯化DNA的方法

5.10异丙醇沉淀纯化法

、,。

通过异丙醇去多糖蛋白纯化DNA的方法

5.11其他商品化核酸提取和纯化试剂盒

参照试剂盒说明书操作。

5.12自行开发的核酸提取和纯化方法

应按照/—的要求进行方法确认。

GBT270252008

6DNA定量

6.1紫外分光光度计法

6.1.1预置分光光度计零点。

,。

充分混匀样品读取和的值

6.1.2260nm280nmOD

/,。

6.1.3计算A260A280比率比率大于1.6表明DNA较纯

6.1.4计算DNA浓度:

单链:/;

DNA1OD=40mL

μg

双链:/;ㅤㅤㅤㅤ

DNA1OD=50mL

μg

DNA浓度(/)稀释倍数/。

L=×A260×40mL÷1000L

gg

μμμμ

6.2定量PCR仪定量

试剂和方法以说明书为准。

6.3其他定量方法

试剂和方法以说明书为准。

人类性别及()多态性分析

7DNASTRshorttandemreeats

p

7.1器材及试剂

检验所用主要器材及试剂如下:

a)全自动荧光分析仪及配套试剂;

b)扩增仪;

)移液器;

c

)()。

d人类荧光标记STR复合扩增试剂盒包括带有ABO分型及直接扩增

试剂配制方法见附录B。

7.2方法

7.2.1人类荧光标记STR复合扩增试剂

7.2.1.1选用获得认证的商品化试剂盒或获得认证的直接扩增试剂盒。

4

/—

GAT3832014

自行开发的试剂应按照/—的要求经方法确认后方可使用于日常检案。

7.2.1.2GBT270252008

7.2.2PCR扩增

,。

7.2.2.1扩增反应体系及循环参数以各试剂盒的说明书为准

7.2.2.2设置阳性对照和阴性对照。

7.2.3PCR反应产物的荧光检测

。、、。

使用全自动荧光分析仪进行检测器材试剂检测方法和数据分析以各试剂盒的说明书为准

8人类线粒体DNA测序

人类线粒体()的非编码区环()含有两个变异率较高的高变区(

DNAmtDNADD-LooHih

pg

,),,

和本标准针对该两个区域和的测序其他的测序

VariableReionsHVRIIIHVRIHVRIIDNA

g

可参照本标准执行。

8.1器材及试剂

检验所用主要器材及试剂如下:

a)全自动荧光分析仪及配套试剂;

b)扩增仪;

)移液器;

c

):()、、、(、列范围比、

dPCR试剂引物高变区或高变区