DB42/T 1110-2015 牛支原体体外药物敏感性检测操作规程

ICS11.220

B41

备案号：DB42

湖北省地方标准

DB42/T1110—2015

牛支原体药物敏感性体外检测操作规程

TechniqueguidelineondrugsensitivitytestofMycoplasmabovisinvitro

（报批稿）

2015-10-30发布2015-12-20实施

湖北省质量技术监督局发布

DB42/T1110—2015

目次

前言..............................................................................II

引言.............................................................................III

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3缩略语............................................................................1

4原理..............................................................................1

5操作步骤..........................................................................2

5.1仪器与耗材....................................................................2

5.2菌株..........................................................................2

5.3操作步骤......................................................................2

5.4结果判断......................................................................3

5.5实验废弃物的处理..............................................................3

附录A（规范性附录）试剂配制........................................................4

附录B（资料性附录）牛支原体颜色变化单位测定方法....................................6

附录C（规范性附录）药物敏感性判断标准..............................................7

参考文献.............................................................................9

I

DB42/T1110—2015

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由华中农业大学提出。

本标准由华中农业大学归口管理。

本标准起草单位：华中农业大学。

本标准协作起草单位：随州市弘大畜牧有限责任公司、湖北省松滋市春珍肉牛养殖场。

本标准起草人：郭爱珍、贺晨飞、晁金、陈颖钰、胡长敏、曹永强、周春、陈焕春。

II

DB42/T1110—2015

引言

牛支原体(Mycoplasmabovis,M.bovis)是牛的一种重要病原体，主要导致牛肺炎，也可致乳腺炎、

关节炎、角膜结膜炎、耳炎、生殖道炎症、流产与不孕等多种病症。该病在世界范围内流行。我省于2008

年在全国首次报道肉牛的牛支原体肺炎，发病率为50%～100%，病死率高达10%～50%，给养牛业造成

了巨大的经济损失。

目前牛支原体病的主要控制措施是抗生素治疗。但由于牛支原体无细胞壁，对常用内酰胺酶类抗菌

药不敏感，对其它抗菌药如喹诺酮类、大环内酯类、氨基糖苷类等虽具有一定的敏感性，但治疗周期长，

效疗差，耐药性产生快。因此，体外药物敏感性检测能为临床治疗筛选敏感药物，提高临床治疗效果，

同时可用于监测牛支原体耐药性产生的趋势。

然而，目前国内外尚无牛支原体体外药物敏感性检测的技术标准，一定程度上阻碍了该病的有效防

治。为此，特制定本标准，旨在为我省牛支原体的有效防控提供技术支持，以推动我省养牛业的健康发

展。

III

DB42/T1110—2015

牛支原体体外药物敏感性检测操作规程

1范围

本标准规定了牛支原体体外药物敏感性检测技术的缩略语、原理和操作步骤规程。

本标准适用于湖北地区牛支原体临床分离株的药物敏感性分析、耐药性流行病学调查和牛支原体病

的临床治疗。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB18597危险废物贮存污染控制标准

DB42/T1024牛支原体肺炎检测技术

CLSIM100-S22抗生素敏感性检测操作标准Performancestandardsforantimicrobial

susceptibilitytesting

中华人民共和国国务院令（2003）第380号医疗废物管理条例

3缩略语

以下缩略语适用于本标准。

3.1M.bovis牛支原体Mycoplasmabovis

3.2PPLO胸膜肺炎样微生物Pleuropnenmonia-likeOrganism

3.3MIC最低抑菌浓度Minimuminhibitoryconcentration

3.4CCU颜色变化单位Colorchangingunit

3.5ATCC美国菌种保藏中心AmericanTypeCultureCollection

3.6CLSI临床和实验室标准协会ClinicalAndLaboratoryStandardsInstitute

4原理

在液体培养基中，牛支原体生长产酸，将导致培养基颜色改变，由红色变为黄色。当抗生素发生抑

菌或杀菌作用时，因无牛支原体生长，培养基将维持红色。

抗生素抑制牛支原体生长的强弱以最低抑菌浓度(MIC)表示，用微量肉汤稀释法测定，具体方法如

下：在96孔板内依次加入倍比稀释的抗菌药，再加入等体积适当稀释的牛支原体液体培养物，置于37℃，

1

DB42/T1110—2015

5%CO2培养箱中培养48h，观察每个孔内颜色的变化，颜色由红色变为黄色表示有牛支原体生长。以不

改变检测管颜色的药物最高稀释倍数所对应的药物浓度(g/mL)为MIC。

5操作步骤

5.1仪器与耗材

Ⅱ级生物安全柜，二氧化碳培养箱，96孔细胞培养板，微量可调移液器及枪头，2mL一次性无菌

离心管，混匀器，冰箱，天平，高压消毒锅，0.22µm微孔滤膜。

5.2菌株

标准菌株：美国微生物菌种保藏中心牛支原体参考株M.bovisPG45（ATCC25523）；

临床分离菌株：临床病料分离纯化的菌株，菌株鉴定按照DB42/T1024中的要求进行。

5.3操作步骤

5.3.1抗菌药溶液配制

根据抗菌药特性，用相应溶剂（如1M氢氧化钠、乙