DB15/T 2074-2021 动物垫料中肺炎克雷伯氏菌检测

ICS07.100.99

CCSB41

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T2074—2021

动物垫料中肺炎克雷伯氏菌检测

DetectionofKlebsiellapneumoniainanimalbedding

2021-01-25发布2021-02-25实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T2074—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由中华人民共和国呼和浩特海关提出并归口。

本文件起草单位：中华人民共和国呼和浩特海关。

本文件主要起草人：王海艳、郝广福、赵治国、靳木子、盛万里、马彩霞、敖威华、崔强、陈林军、

延涵、陈宇飞。

I

DB15/T2074—2021

动物垫料中肺炎克雷伯氏菌检测

1范围

本文件规定了动物垫料中肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定定性检测法。

本文件适用于动物垫料中肺炎克雷伯氏菌定性检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T33682基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则

SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则

SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

动物垫料animalbedding

用于吸收动物排泄物，使动物保持舒适生活环境的铺垫物。

注：包括动物笼内非直接与动物机体接触的铺垫物。

4设备和材料

4.1冰箱：2℃～5℃。

4.2恒温培养箱：36℃±1℃。

4.3均质器。

4.4漩涡振荡器。

4.5电子天平：感量0.1g。

4.6全自动微生物生化鉴定系统。

4.7飞行时间质谱仪。

4.8二级生物安全柜。

4.9光学显微镜。

4.10水浴装置：36℃±1℃。

4.11pH计。

1

DB15/T2074—2021

4.12无菌锥形瓶：容量500mL，250mL。

4.13无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。

4.14无菌培养皿：15mm×90mm。

4.15无菌试管：18mm×180mm。

4.16无菌棉签。

4.17无菌镊子。

4.18无菌剪刀。

4.19无菌勺。

4.20无菌载玻片。

4.21无菌接种环。

5培养基和试剂

肺炎克雷伯氏菌常用培养基与试剂灭菌后保存期限见附录B。

5.1实验用水：符合GB/T6682的要求。

5.2SCDLP液体培养基：见附录A中A.2。

5.3胆硫乳琼脂（DHL)：见附录A中A.3。

5.4营养琼脂培养基：见附录A中A.4。

5.5革兰氏染色液：见附录A中A.5。

5.6动力半固体琼脂：见附录A中A.6。

5.7氧化酶试剂：见附录A中A.7。

5.8无菌0.85%生理盐水：见附录A中A.8。

5.9生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡。

5.10飞行时间质谱仪靶板。

5.11肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种ATCC35657，或等效菌株。

6检验程序

肺炎克雷伯氏菌检验程序见图1。

2

DB15/T2074—2021

样品制备

检样25g或25cm2样液+225mLSCDLP增菌

36℃±1℃，18h～24h

划线接种DHL琼脂平板

36℃±1℃，18h～24h，厌氧培养

挑取可疑菌落，接种动力半固体琼脂和营养琼脂

36℃±1℃，18h～24h

革兰氏染色镜检/氧化酶试验

确定鉴定

图1肺炎克雷伯氏菌检验程序

7操作步骤

7.1取样

7.1.1取样原则

应遵循随机性、代表性的原则。取样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。

7.1.2样品处理

7.1.2.1颗粒状或粉末样品

对送检样品包装内不同部位样品进行随机多点取样至少250g，充分混匀后称取25g颗粒状或粉末

状垫料样品，加入225mLSCDLP，充分振摇或均质1min～2m