JJF 1828-2020 ATP荧光检测仪校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范

JJF1828—2020

ATP荧光检测仪校准规范

CalibrationSecificationforAdenosineTrihoshateATP

ppp()

FluorescenceDetectors

2020-01-17发布2020-04-17实施

国家市场监督管理总局发布

JJF1828—2020

荧光检测仪校准规范

ATP

—

CalibrationSpecificationforAdenosineJJF18282020

TriphosphateATPFluorescenceDetectors

()

归口单位全国生物计量技术委员会

:

主要起草单位中国计量科学研究院

:

参加起草单位河北省计量科学研究院

:

本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释

JJF1828—2020

本规范主要起草人

:

傅博强中国计量科学研究院

()

唐治玉中国计量科学研究院

()

参加起草人

:

宋增良河北省计量科学研究院

()

吕亮中国计量科学研究院

()

JJF1828—2020

目录

引言

………………………(Ⅱ)

范围

……………………()

11

引用文件

2………………(1)

术语和计量单位

3………………………(1)

相对光单位

3.1…………(1)

概述

4……………………(1)

计量特性

………………()

51

背景噪声值

5.1…………(1)

检测限

5.2………………(1)

线性范围及相关系数

5.3………………(1)

重复性

5.4………………(1)

相对示值误差

5.5………………………(2)

校准条件

………………()

62

环境条件

6.1……………(2)

标准物质检测拭子或试剂仪器

、、………………()

6.22

校准项目和校准方法

7…………………(2)

背景噪声值

7.1…………(2)

检测限

………………()

7.23

线性范围及相关系数

7.3………………(3)

重复性

7.4………………(4)

线性误差

7.5……………(5)

校准结果表达

8…………(6)

复校时间间隔

…………()

96

附录系列标准工作溶液的配制

AATP……………(7)

附录物质的量测量的线性误差校准不确定度评定示例

……()

BATP8

附录光亮度测量的线性误差校准不确定度评定示例

C……………(13)

附录法校准原始记录格式推荐性表格

DATP()…………………(16)

附录可调弱光发生器模拟法校准原始记录格式推荐性表格

()………………()

E18

附录校准证书内页格式推荐性表格

F()()……(20)

Ⅰ

JJF1828—2020

引言

本规范依据国家计量校准规范编写规则的要求编写

JJF1071—2010《》。

本规范主要参考燃料燃料水混合物燃料相关的水中微生

ASTMD7463-14a《、/、

三磷酸腺苷含量标准检测方法

(ATP)》[StandardTestMethodforAdenosine

(),/,

riphosphateATPContentofMicroorganismsinFuelFuelWaterMixturesand

制定

uelAssociatedWater]。

本规范为首次发布

。

Ⅱ

JJF1828—2020

ATP荧光检测仪校准规范

1范围

本规范适用于手持式和台式荧光检测仪的校准

ATP。

2引用文件

本规范引用了下列文件

:

燃料燃料水混合物燃料相关的水中微生物三磷酸腺苷

、/、

ASTMD7463-14a

含量标准检测方法

(ATP)[StandardTestMethodforAdenosineTriphosphate(ATP)

ContentofMicroorganismsinFuel,Fuel/WaterMixtures,andFuelAssociatedWater]

凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本规范凡是不注日期的引用文

,;

件其最新版本包括所有的修订单适用于本规范

,()。

3术语和计量单位

相对光单位

3.1relativelightunit;RLU[ASTMD7463-14a,3.1.19]

三磷酸腺苷水解为一磷酸腺苷

(,)(

AdenosineTriphosphateATPAdenosine

和焦磷酸盐释放化学能驱动荧光素在荧光素酶催化下氧化释

Monohoshate,AMP)

pp

放的光量子数的测量单位

。

注:非单位,但与浓度成比例关系。不同的检测仪对于同样的光量子数可能会产生不

SIATP

同的读数。

RLU

4概述

荧光检测仪以下简称仪器由检测仓控制面板光电探测器雪崩二极

ATP()、、(

管或光电倍增管检测器等和数据采集信号处理系统等组成并配备有配套的含有荧光

),

素和荧光素酶混合物的拭子或试剂采集样本中的后与荧光素和荧光素酶混合

。ATP,

物反应会产生左右的生物发光在适当低的浓度范围内发光强度与

,。,

550nmATP

浓度成一定比例关系根据相对光单位可以推算出样本被食物残渣和微生物

ATP。RLU

污染的程度对总体洁净度进行监测

,。

仪器可分为手持式和台式

。

5计量特性

背景噪声值

5.1

检测限

5.2

线性范围及相关系数

5.3

重复性

5.4

1

JJF1828—2020

相对示值误差

5.5

6校准条件

环境条件

6.1

环境温度

6.1.1:(15~30)℃。

相对湿度

6.1.2:≤80%。

超净工作台洁净等级级

,。

6.1.3100

标准物质检测拭子或试剂仪器

6.2、、

纯度有证标准物质纯度相对扩展不确定度Uk

6.2.1ATP:≥99%,≤1%(=2)。

检测拭子或试剂不同仪器配备的专用拭子手持式或试剂台式

6.2.2ATP:()(),

依据厂家要求在冰箱中冷藏或冻藏在保质期内临用前从冰箱中取

(2~8)℃-20℃。,

出放置至少平衡至室温

10min,。

高压灭菌水或注射用水无为医药级无热原水

6.2.3:ATP,。

移液器各支经检定

6.2.4:(1~10)μL,(10~100)μL,(100~1000)μL1,

合格

。

电子天平分度值经检定合格

6.2.5:0.01mg,。

离心管无菌无

6.2.6:15mL,、ATP。

2

可调弱光发生器弱光亮度相对扩展不确定度Uk连

:(/),(),

6.2.7cdm≤5%=2

续可调并可数字显示光亮度

,。

7校准项目和校准方法

背景噪声值

7.1

法

7.1.1ATP

在超净工作台中用移液器移取水滴于拭子的擦拭

,(1~10)L(6.2.3)10L,

μμ

头手持式上或检测池台式中与荧光素和荧光素酶混合试剂混合反应记录仪

()(),,

器示值连续读取次得到仪器背景值按式计算背景值的平均值加

RLU,10,。(1),

上其倍标准偏差s作为仪器的背景噪声值N

3,。

可调弱光发生器模拟法

7.1.2

将可调弱光发生器的发光探头放入仪器的检测仓中关掉光源记录仪器示

,,RLU

值连续读取次得到仪器背景值按式计算背景值的平均值加上其倍标

,10,。(1),3

准偏差s作为仪器的背景噪声值N

,。

n

Bi-B2

i=()

N=B+s=B+∑1

33n-(1)

1

式中

:

N仪器的背景噪声值

———,RLU;

B次测定的背景值的算术平均值

———10,RLU;

s次测定的背景值的标准偏差

———10,RLU;

2

JJF1828—2020

Bi第i次测定的背景值

———,RLU;

n测定次数

———。

检测限

7.2

在超净工作台中用移液器移取某浓度的标准工作溶液按照

,(1~10)μLATP(

附录配制滴于拭子的擦拭头手持式上或检测池台式中浓度选取

A)10μL,()()。

仪器声称的检出限浓度某浓度的标准工作溶液与荧光素和荧光素酶混合

ATP。ATP

试剂混合反应分别记录仪器示值若此浓度下仪器示值为则浓度增

,RLU。,RLU0,

加倍共进行个平行测定实验取平均值

。,。

103

对于背景噪声值法为的仪器由示值大于的最低浓度的

(ATP)0,RLU0ATP

标准工作溶液对应的物质的量按式计算将示值为时对应

ATP(mol),(2),RLU1

的物质的量作为检测限

ATP。

n

×stdi

n=1

LOD()

2

RLUstdi

式中

:

n仪器的检测限对应的物质的量

LOD———,;

ATPmol

检测限对应的示值

1———RLU;

n示值大于的最低浓度的标准工作溶液i对应的物质的

stdi———

RLU0ATPATP

量

,mol;

示值大于的最低浓度的标准工作溶液的仪器示值平均

i

stdi

RLU———RLU0ATP

值

,。

RLU

对于式计算的背景噪声值法大于的仪器由示值平均值大

(1)(ATP)10,RLU

于背景噪声值的最低浓度的标准工作溶液其示值平均值与背景噪声值的

ATP,RLU

比值为该浓度标准工作溶液的信噪比R由其对应的物质的量按

,(),

ATPATPmol

式计算将信噪比为时对应的物质的量作为检测限

(3),3ATP。

×n×n

stdistdi

n=3=3

LODRN()

3

stdistdi

RLU/

式中

:

仪器的检测限对应的物质的量

n

LOD———ATP,mol;

检测限对应的信噪比

3———;

n示值平均值大于背景噪声值的最低浓度的标准工作溶液i对应

stdi———RLUATP

的物质的量

ATP,mol;

R示值平均值大于背景噪声值的最低浓度的标准工作溶液i对应

stdi

———RLUATP

的信噪比

;

示值平均值大于背景噪声值的最低浓度的标准工作溶液i的仪

RLUstdi———RLUATP

器示值平均值

,RLU;

N仪器的背景噪声值

———,RLU。

线性范围及相关系数

7.3

法

7.3.1ATP

3

JJF1828—2020

在超净工作台中用移液器分别移取个浓度的标准工作溶液

,(1~10)μL5ATP

各建议的标准溶液浓度点至少做个点根据最低和最高浓度测出的

10μL。ATP(5,

值的大小可对标准工作溶液的浓度值做适当的调整对于手持式仪器为

RLU,):,

-13-12-11-10和

1×10mol/mL、1×10mol/mL、1×10mol/mL、1×10mol/mL0.5×

-9对于台式仪器采用光电倍增管检测器为-15

10mol/mL;(),1×10mol/mL、1×

-14-13-12和-11将

10mol/mL、1×10mol/mL、1×10mol/mL1×10mol/mL。10μL

的标准工作溶液滴于拭子的擦拭头上与荧光素和荧光素酶混合试剂混合反应

,,

ATP

记录仪器示值以物质的量和仪器示值绘制校准曲线进

xy

RLU。ATP()RLU(),

行线性拟合得到校准方程按式计算相关系数r取r的浓度范围作为

,,(4),≥0.995

线性范围若r时则去掉最高浓度点增加倍最高浓度值的检测点与

。<0.995,,0.5,

余下的浓度点重新绘制校准曲线若r则新范围作为线性范围若r仍然

;≥0.995,。

则继续下调标准溶液的浓度

,。

<0.995

可调弱光发生器模拟法

7.3.2

将可调弱光发生器的发光探头放入仪器的检测仓中调节发光亮度对于手持式仪

,。

器设定个测试点如使示值分别为和

,≥7(RLU1、10、100、1000、2500、5000

左右对于台式仪器光电倍增管检测器设定个测试点如使示值

7500);(),≥7(RLU

分别为和左右记录下控制器数

、、、、、)。

1010010005000100001000001000000

字显示的对应的光亮度2和仪器示值以仪器示值和光亮度

(cd/m)RLU。RLU

2进行线性拟合按式计算相关系数r取r的光亮度范围作为线

(/),(),

cdm4≥0.995

性范围若时则去掉高值光亮度点个取余下的光亮度点重新绘制

r

。<0.995,1~2,,

标准曲线直至r将新范围作为线性范围

,≥0.995,。

n

()()

xi-xyi-y

i

=