T/CVDA 3-2022 动物埃博拉病毒中和抗体检测技术

范围:本标准规定了用于动物埃博拉病毒血清中和抗体测定的实验操作方法及结果判定标准。 本标准适用于动物血清中埃博拉病毒中和抗体的定性检测和定量测定; 主要技术内容:埃博拉出血热（Ebola hemorrhagic fever，EHF）是由埃博拉病毒（Ebola virus，EBOV）感染引起的急性，发热并伴有严重出血症状的烈性人兽共患病。EBOV是致死率最高的病原之一，感染后致死率最高可达90%。自1976年EHF在扎伊尔东北部和苏丹南部暴发以来，至今发生过多次疫情。研制能够快速鉴定病毒感染的血清学方法，以采取针对性治疗措施、预防病毒扩散，非常重要。本标准利用水泡性口炎病毒（VSV）的反向遗传操作系统，以EBOV的糖蛋白基因GP替换VSV基因组的糖蛋白基因G，同时表达增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP），构建成表达EGFP的嵌合型重组病毒VSVΔG-EBOVGP-EGFP。EBOV的GP蛋白是诱导中和抗体产生的唯一结构蛋白，此重组病毒VSVΔG-EBOVGP-EGFP表达EBOV的GP蛋白，可以与含有EBOV中和抗体的血清特异性结合并被血清中和，阻断病毒感染。目前检测EBOV中和抗体的方法主要是通过EBOV活毒在生物安全四级实验室进行，受试验条件限制且生物安全风险高。以VSVΔG-EBOVGP-EGFP代替EBOV活毒进行EBOV中和抗体检测可以在BSL-2实验室进行操作。本标准以人或动物血清为检测对象，以EBOV的糖蛋白基因GP替换VSV基因组的糖蛋白基因G拯救得到的嵌合型重组病毒VSVΔG-EBOVGP-EGFP为检测抗原，可以与含有EBOV中和抗体的血清特异性结合并被血清中和，阻断病毒感染。该检测技术可以对疑似感染EBOV的人或动物血清、或经EBOV疫苗免疫的人或动物血清的中和抗体水平在BSL-2实验室进行评价