DB41/T 2595-2024 猪急性腹泻综合征诊断技术

ICS65.020.30

CCSB41

41

河南省地方标准

DB41/T2595—2024

猪急性腹泻综合征诊断技术

2024-02-01发布2024-05-01实施

河南省市场监督管理局发布

DB41/T2595—2024

目次

前言.................................................................................II

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3术语和定义.........................................................................1

4缩略语.............................................................................1

5临床诊断...........................................................................1

6样品采集及处理.....................................................................2

7病原分离与鉴定.....................................................................3

8RT-PCR检测方法.....................................................................3

9荧光PCR检测方法...................................................................5

10综合判定..........................................................................7

附录A（规范性）核酸提取及聚PCR反应溶液的配制.......................................8

附录B（资料性）SADS-CoVRT-PCR产物电泳图及荧光PCR扩增曲线图......................10

I

DB41/T2595—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由河南省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：河南省动物疫病预防控制中心、襄城县动物疫病预防控制中心、南阳市卧龙区动

物疫病预防控制中心、修武县云台山镇综合行政执法大队。

本文件主要起草人：班付国、闫若潜、王淑娟、赵雪丽、谢彩华、马震原、王东方、杨海波、王翠、

郭育培、刘影、宋丹、刘礼杰、赵美雪、张利平、赵胜杰、冉晓龙、曹俊伟、张玲、杜燕玲。

II

DB41/T2595—2024

猪急性腹泻综合征诊断技术

1范围

本文件规定了猪急性腹泻综合征的临床诊断、样品采集及处理、病毒分离与鉴定、反转录聚合酶链

式反应（RT-PCR）和实时荧光RT-PCR的技术要求。

本文件适用于猪急性腹泻综合征的临床诊断和检测。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

SADS：猪急性腹泻综合征（SwineacuteDiarrhoeaSyndrome）

SADS-CoV：猪急性腹泻综合征冠状病毒（SwineacuteDiarrhoeaSyndromeCoronavirus）

RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（Reversetranscription-polymerasechainreaction）

FQ-PCR：荧光-聚合酶链式反应（FluorescenceQuantitative-polymerasechainreaction）

EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylenediaminetetraaceticacid）

PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphatebufferedsaline）

DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethypyrocarbonate）

cDNA：互补脱氧核糖核酸（complementaryDNA）

vero：非洲绿猴肾细胞（VerdaReno）

5临床诊断

5.1流行病学

5.1.1SADS是由SADS-CoV引起的一种新型猪肠道冠状病毒病，该病毒可感染不同日龄的猪，仔猪最

易感染，感染后2d～6d发病，5日龄以内的仔猪病死率最高可达90％以上，8日龄以上的仔猪病死

率相对较低；成年猪感染后多数只出现轻度腹泻，2d～3d后大部分猪可自行痊愈。

5.1.2发病猪及带毒猪为主要的传染源。主要通过直接接触传播，病猪可通过粪-口以及病毒污染的物

品、饲料、垫料、设施设备及地面等传播。

5.1.3SADS一年四季均可发生，冬春季多发。

5.2临床症状

发病仔猪出现急性腹泻、呕吐，脱水、体重迅速下降或死亡；成年猪感染出现轻度腹泻。

1

DB41/T2595—2024

5.3病理变化

小肠肠道变薄、变透明，肠内充满黄色水样物质，肠系膜充血；组织病理学检查，空肠和回肠内肠

绒毛萎缩、脱落，肠绒毛上皮细胞变性、坏死。

5.4结果判定

易感动物符合5.1且出现5.2临床症状、5.3病理变化时，可判为疑似猪急性腹泻综合征。

6样品采集及处理

6.1主要试剂

6.1.10.01mol/LPBS（pH7.4），按A.1和A.2配制。

6.1.2青霉素，浓度为1000IU/mL。

6.1.3链霉素，浓度为500IU/mL。

6.2用具

6.2.1器械：解剖刀、剪刀、镊子、注射器及针头、组织匀浆仪等。

6.2.2个人防护用具：防护服、防护镜、防护帽、防护靴、口罩、一次性手套等。

6.2.3采样记录用品：采样单、记号笔、防水标签等。

6.2.4其他：2mL离心管、0.22µm微孔滤器、医用棉签、冰袋等。

6.3样品采集和运输

6.3.1粪便及组织样品

无菌采集疑似SADS-CoV感染腹泻猪急性期的新鲜粪便（1.0g～2.0g）或小肠中段（1.0cm～

2.0cm），放入密封袋中，置于带有冰袋的保存箱中，送至实验室，附带的冰袋里的冰应未完全融化；

如样品不能被及时送到实验室，应置于-20℃冰箱中保存，保存期应不超过1个月。

6.3.2血清样品

采集疑似SADS-CoV感染猪的血液样品，每只不少于5mL，室温放置12h～24h，分离血清，装入

离心管中，密封后冷藏或冷冻保存。

6.4样品处理及保存

6.4.1粪便样品

取0.1g～0.2g新鲜粪便置于2mL离心管中，加入0.01mol/LPBS（pH7.4，含终浓度1000IU/mL

的青霉素、500IU/mL的链霉素）1.0mL～2.0mL，摇匀，经3000r/min离心10min，取上清液，经

0.22µm微孔滤器过滤，分装，－20℃保存备用。如需长期保存，应置于-80℃冰箱。

6.4.2组织样品

取1.0cm～2.0cm小肠组织，用剪刀剪碎后放入2mL离心管中并加入0.01mol/LPBS（pH7.4，

含