DB22/T 1617-2012 饲料中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫的测定 液相色谱-质谱/质谱法

ICS65.120

B04

备案号：35745-2013DB22

吉林省地方标准

DB22/T1617—2012

饲料中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和

隐色结晶紫的测定液相色谱-质谱/质谱法

Determinationofmalachitegreen、leucomalachitegreen、crystalvioletand

leucocrystalvioletinfeeds——HPLC-MS/MSmethod

2012-12-01发布2013-01-01实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T1617—2012

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心、珲春出入境检验检疫局技术中心、白

城出入境检验检疫局技术中心。

本标准主要起草人：康明芹、张琦、张勋、冯博、孟日增、杨帆、张代辉、胡婷婷。

I

DB22/T1617—2012

饲料中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫的测定

液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本标准规定了饲料中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫的液相色谱-质谱/质谱测定方

法。

本标准适用于饲料中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫的测定和确证。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

试样经乙腈-乙酸铵缓冲溶液提取，二氯甲烷和水液液萃取，再经中性氧化铝固相萃取小柱净化，液

相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1无水乙酸铵(CH3COONH4)：优级纯。

4.2盐酸羟胺(HONH3Cl)。

4.3对-甲苯磺酸（C7H8O3S）。

4.4标准物质：孔雀石绿（MG）、隐色孔雀石绿(LMG)、结晶紫(CV)、隐色结晶紫（LCV）纯度均≥

98%。标准物质信息参见附录A。

4.5乙腈（CH3CN）：色谱纯。

4.6甲酸（HCOOH）：色谱纯。

4.7二氯甲烷（CH2Cl2）：优级纯。

4.8冰醋酸（CH3COOH）：优级纯。

4.90.1mol/L乙酸铵缓冲溶液：称取1.54g无水乙酸铵溶解于200mL水中，混匀，并用冰醋酸调pH

值到4.5。

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DB22/T1617—2012

4.100.25g/mL盐酸羟胺溶液：称取25.0g盐酸羟胺，用水溶解并定容至100mL。

4.111.0mol/L对-甲苯磺酸溶液：称取17.2g对-甲苯磺酸，用水溶解并定容至100mL。

4.120.1%甲酸溶液：取1.0mL甲酸(4.6)，用水稀释并定容至1000mL。

4.13样品定容液：乙腈-0.1%甲酸溶液(8+2)。量取80mL乙腈(4.5)与20mL的0.1%甲酸溶液(4.12)，

混匀。

4.14标准储备液：0.1mg/mL。准确称取适量的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫标准

物质（4.4），分别用少量乙腈溶解并转移至100mL容量瓶中，分别用乙腈定容至刻度，混匀。

4.15标准工作液：10.0μg/L。首先分别准确吸取上述四种硝基呋喃代谢物标准储备液（4.14）用乙腈

稀释成1.0mg/L的溶液，然后从中准确吸取1.0mL于100mL容量瓶中，用样品定容液稀释并定容至

刻度，混匀。

4.16中性氧化铝固相萃取小柱：500mg/6mL，使用前用10mL乙腈预处理。

4.17滤膜：0.22µm，有机系。

5仪器与设备

5.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。

5.2高速匀浆机。

5.3旋转蒸发仪。

5.4天平：感量0.0001g和0.01g。

5.5高速离心机：10000r/min。

5.6涡旋混合器。

5.7聚丙烯离心管：50mL。

5.8超声波清洗器：40kHz。

5.90.28mm孔筛。

6试样制备

取有代表性样品，粉碎，过0.28mm筛，混匀备用。

7测定步骤

7.1提取

称取2g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，依次加入1mL乙酸铵缓冲溶液（4.9）、1mL盐酸

羟胺溶液（4.10）、1mL对-甲苯磺酸溶液（4.11）和24mL乙腈，高速匀浆2min，10000r/min离心4min，

将上清液转移至500mL分液漏斗中。剩余残渣用20mL乙腈重复提取一次，合并上清液。于分液漏斗中

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DB22/T1617—2012

加入30mL二氯甲烷、20mL水，振摇2min，静止分层，收集下层有机相于250mL浓缩瓶中，再用20mL

二氯甲烷重复萃取一次，合并下层有机相，40℃旋转蒸发至近干。

7.2净化

将上述浓缩瓶中残渣用10mL乙腈分三次（每次约3mL）超声溶解，并依次通过预处理过的中性氧

化铝固相萃取小柱（4.16），收集洗脱液。再用20mL乙腈分四次进行洗脱，合并洗脱液于鸡心瓶中，

40℃旋转蒸发至干，用乙腈-0.1%甲酸溶液（4.13）定容至1mL，过0.22μm滤膜，滤液供LC-MS/MS测

定。

7.3混合基质标准溶液的制备

称取7份2g（精确至0.01g）阴性试样于50mL离心管中，操作同7.1和7.2至“……用乙腈-0.1%甲酸

溶液（4.12）定容至1mL，过0.22μm滤膜”后分别加入少量标准溶液使浓度分别为1.0、2.5、5.0、10.0、

20.0、50.0、100.0μg/L，供LC-MS/MS测定。

7.4空白试验

除不称取试样外，均按7.1、7.2进行。

7.5测定

7.5.1色谱参考条件

色谱参考条件如下：

a)色谱柱：C18，2.1mm×150mm，3.5μm；

b)柱温：室温；

c)流速：0.25mL/min；

d)进样量：10μL；

e)流动相：乙腈-0.1%甲酸溶液（8+2）。

7.5.2质谱参考条件

质谱参考条件如下：