T/ACEF 227-2025 流域典型水生生物环境 DNA 监测技术规范

ICS13.020.01

CCSZ10/29

团体标准

T/ACEF227—2025

流域典型水生生物环境DNA监测技术规范

TechnicalspecificationforenvironmentalDNAmonitoringofrepresentative

aquaticorganismsinriverbasins

2025-10-31发布2025-12-01实施

中华环保联合会发布

T/ACEF227—2025

目次

前言......................................................................................II

1范围.....................................................................................1

2规范性引用文件...........................................................................1

3术语和定义...............................................................................1

4技术流程.................................................................................4

5技术规范.................................................................................4

5.1试剂耗材.............................................................................4

5.2样点布设.............................................................................6

5.3水样采集.............................................................................6

5.4水样过滤.............................................................................6

5.5DNA提取和纯化.......................................................................7

5.6PCR扩增.............................................................................8

5.7测序与数据分析.......................................................................9

5.8质量控制............................................................................10

5.9废弃物处理.........................................................................11

附表A（资料性）环境DNA采样记录表.......................................................12

附表B（资料性）长江黄河流域典型水生生物环境DNA监测引物信息............................13

附表C（资料性）常用引物参考标记序列表...................................................14

附表D（资料性）流域水生生物环境DNA监测物种信息统计表..................................15

I

T/ACEF227—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中华环保联合会提出并归口。

本文件主编单位：中国科学院生态环境研究中心、中国环境监测总站、北京师范大学。

本文件参编单位：珠江水资源保护科学研究所、江西省生态环境监测中心、南京大学盐城环保技术

与工程研究院、云南农业大学、中华环保联合会水环境治理专业委员会。

本文件主要起草人：战爱斌、李世国、金小伟、左锐、熊芳园、曾芳发、邢立群、王甫文、杜珣、

张妙连、何丹、张家俊、王建雄、罗春辉、刘愿军、王艳霞。

II

T/ACEF227—2025

流域典型水生生物环境DNA监测技术规范

1范围

本规范规定了基于环境DNA技术开展长江和黄河流域典型水生生物类群监测的试剂耗材、样点布

设、水样采集、水样过滤、DNA提取、PCR扩增、测序与数据分析和质量控制等内容。

本规范适用于长江和黄河流域河流、湖泊、水库等水体中基于环境DNA技术的浮游动物、浮游藻

类和鱼类监测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T30989高通量基因测序技术规程

GB/T35537高通量基因测序结果评价要求

GB/T35890高通量测序数据序列格式规范

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

T/CSES81-2023淡水生物监测环境DNA宏条形码法

T/CTESGS01-2022长江流域河流水生态监测技术规程

HJ710.7—2004生物多样性观测技术导则内陆水域鱼类

HJ1295—2023水生态监测技术指南河流水生生物监测与评价（试行）

HJ1296—2023水生态监测技术指南湖泊和水库水生生物监测与评价（试行）

HJ494水质采样技术指导

SL733—2016内陆水域浮游植物监测技术规程

SC/T9402—2010淡水浮游生物调查技术规范

DB32/T4178河流水生态监测规范

DB43/T432淡水生物资源调查技术规范

DB11/T2023鱼类贝类环境DNA识别技术规范

DB11/T2358-2024淡水大型底栖无脊椎动物环境DNA监测技术规范

DB32/T4539-2023淡水生物环境DNA监测技术方法

SN/T4835-2017实验室生物废弃物管理要求

3术语和定义

1

T/ACEF227—2025

3.1

环境DNAenvironmentalDNA(eDNA)

是指从环境样本（如水、土壤、沉积物、空气等）中提取的、来源于生物体释放的游离DNA或细

胞残留DNA。DNA片段可能来自生物体的代谢排泄、脱落细胞、生殖细胞、黏液、死亡分解等过程。

就长江黄河流域而言，环境DNA除了上述来源外，还来源于单细胞生物如浮游藻类。

3.2

水生生物aquaticorganisms

全部或部分生活在各种水域中的生物。主要的淡水生物类群包括浮游藻类、浮游动物、水生维管植

物、大型底栖无脊椎动物和鱼类等。

3.3

23S核糖体DNA23SribosomalDNA(23SrDNA)

原核生物编码核糖体大亚基23SrRNA的DNA序列。

3.4

18S核糖体DNA18SribosomalDNA(18SrDNA)

真核生物编码核糖体小亚基18SrRNA的DNA序列。

3.5

12S核糖体DNA12SribosomalDNA(12SrDNA)

真核生物线粒体基因组上12SrRNA对应的DNA序列。

3.6

DNA宏条形码技术DNAmetabarcoding

利用高通量测序获取环境样本（如水、沉积物、土壤、空气等）或混合生物组织中的特定DNA片

段，根据物种间特定DNA序列差异识别物种，获取物种组成和群落结构等信息的方法。

3.7

操作分类单元operationaltaxonomicunit(OTU)

DNA宏条形码测序数据按照序列相似性阈值进行聚类，所形成的用于表征物种的分子水平分类单

元。

3.8

引物

在DNA复制过程中，结合于模板链上并作为复制延伸的起始位点和/或终止位点的，具有一定长度

和顺序的寡核苷酸链。

3.9

聚合酶链式反应polymerasechainreaction(PCR)

2

T/ACEF227—2025

一种体外酶促合成特异DNA片段的分子技术，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成

一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便省时等特点。

3.10

阴性对照negativecontrol

不含待测物种或者所有物种DNA的样品（如灭菌超纯水），与待测样品同步实验，用于判断待测

样品是否被污染。

3.11

阳性对照positivecontrol

已知物种组成的基因组DNA或人工合成含有目标序列的DNA片段的混合物，与待测样品同步实

验，用于判断结果是否可靠。

3.12

二代测序next-generationsequencing

第二代测序又称为高通量测序，是基于PCR和基因芯片发展而来的DNA测序技术，具有通量高、

速度快、读长短的特点。

3.13

序列覆盖度sequencecoverage

反映序列间相似程度的数值，即测序序列与文库序列间比对成功的片段在测序序列中所占碱基数目

的比例，一般以百分数表示。

3.14

序列相似性sequencesimilarity

反映序列间相似程度的数值，即序列间覆盖片段中相同DNA碱基数目所占的比例，以百分数表示。

3.15

浮游藻类phytoplankton

悬浮于水体、缺乏主动移动能力或移动能力较弱的光合自养或混合营养微型生物群落，常见的种类

主要包括硅藻、绿藻、蓝藻等类群，个体大小通常为2-200μm。

3.16

浮游动物