DB37/T 3738-2019 水质 磺胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生素的测定 固相萃取/液相色谱-三重四极杆质谱法

ICS13.060

Z16

DB37

山东省地方标准

DB37/T3738—2019

水质磺胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生

素的测定固相萃取/液相色谱-三重四极

杆质谱法

Waterquality-DeterminationofantibioticsofSulfonamides,Quinolonesand

Macrolidesbysolidphaseextraction-Liquidchromatographytriplequadrupolemass

spectrometry

2019-12-05发布2020-01-05实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T3738—2019

目次

前言................................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3方法原理..........................................................................1

4干扰与消除........................................................................1

5试剂和材料........................................................................1

6仪器和设备........................................................................2

7样品..............................................................................3

8分析步骤..........................................................................3

9结果计算与表示....................................................................5

10精密度和准确度...................................................................7

11质量保证和质量控制...............................................................7

12废物处理.........................................................................8

附录A（规范性附录）方法的检出限和测定下限..........................................9

附录B（资料性附录）质谱参考条件...................................................10

附录C（资料性附录）方法的精密度和准确度...........................................11

I

DB37/T3738—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省生态环境厅提出并组织实施。

本标准由山东省环保标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省环境监测中心。

本标准主要起草人：郭文建、张慧、朱晨、王桂勋、岳太星、李红莉、丁波涛。

II

DB37/T3738—2019

水质磺胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生素的测定固相萃取/

液相色谱-三重四极杆质谱法

警告：实验中使用的溶剂和试剂均具有一定的毒性，对健康具有潜在的危害，应尽量避免与这些化

学品的直接接触。样品制备过程应在通风橱中进行，操作时应按规定要求佩戴防护器具,避免接触皮肤

和衣物。

1范围

本标准规定了测定水中磺胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生素的固相萃取/液相色谱-三重四极杆质

谱法。

本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲氧嘧

啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲嘧啶、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、氟罗沙星、脱水红霉素、罗红霉素、

螺旋霉素12种抗生素的测定。

当取样500ml，定容体积为1.0ml，进样体积为20μl时，方法检出限为0.001μg/L～0.007μ

g/L，测定下限为0.004μg/L～0.028μg/L，详见附录A。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

HJ/T91地表水和污水监测技术规范

HJ/T164地下水环境监测技术规范

3方法原理

水样中的抗生素类化合物经固相萃取法富集、净化后，用液相色谱-三重四极杆质谱法分离检测。

根据化合物的保留时间和特征离子峰定性，内标法定量。

4干扰与消除

金属离子与抗生素能形成络合物，使固相萃取效率降低，可向水样中加入乙二胺四乙酸二钠抑制络

合物的形成。水中余氯等其他具有氧化性的有机物会干扰磺胺类抗生素的测定，可向水中加入抗坏血酸

消除干扰。

5试剂和材料

除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为不含目标化合物的纯水。

5.1盐酸：ρ（HCl）=1.19g/ml。

1

DB37/T3738—2019

5.2硫酸：ρ（H2SO4）=1.84g/ml。

5.3乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.4甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.5甲酸（HCOOH）：色谱纯。

5.6乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2Na2O8•2H2O）。

5.7抗坏血酸（C6H8O6）。

5.8盐酸溶液：1+1。

5.9硫酸溶液：c(H2SO4)=4.0mol/L。量取22ml硫酸（5.2），缓慢加入到水中，待温度降至室温后，

用水定容至100ml。

5.10pH2.0去离子水：用盐酸（5.8）溶液调节去离子水至pH为2.0。

5.110.1%甲酸溶液：量取0.5ml甲酸（5.5），缓慢加入水中，用水定容到500ml。

5.12甲醇/乙腈混合溶液：1+1。

5.130.1%甲酸甲醇/乙腈混合溶液：量取0.5ml甲酸（5.5），缓慢加入到甲醇/乙腈混合溶液（5.12）

中，用甲醇/乙腈混合溶液（5.12）定容至500ml。

5.14稀释溶剂：3+1。取75ml0.1%的甲酸溶液（5.11）和25ml0.1%甲酸甲醇/乙腈混合溶液（5.13）

于玻璃容器中，混合均匀。

5.15标准贮备液：ρ=100mg/L。准确称取10.0mg抗生素类化合物标准物质，用甲醇溶解后，转移

到100ml棕色容量瓶中，定容至标线。此溶液在-10℃以下避光可保存1年。也可以直接购买有证标

准溶液，参照制造商的产品说明保存。

5.16脱水红霉素标准贮备液：ρ=2.00mg/L。脱水红霉素可直接购买标准物质（纯度≥95%）或者由

红霉素制备。量取400μl100mg/L红霉素贮备液于20ml棕色瓶中，加入19.6ml甲醇（5.4），然

后加入约10μl硫酸溶液（5.9）调pH至3.0，室温下震荡4h，于-10℃以下避光可保存2个月。

5.17标准使用液：ρ=1.00μg/ml。将12种抗生素类化合物标准贮备液（5.15）用适量的甲醇（5.4）

稀释，临用现配。

13

5.18内标贮备液：ρ=200μg/ml。内标物为阿特拉津-C3。可用标准物质配制，标准物质纯度大于

99.0%，用适量的甲醇（5.4）溶解。也可直接购买有证标准溶液。贮备液应在-10℃以下避光保存或

参照制造商的产品说明。

5.19替代物贮备液：ρ=200μg/ml。喹诺酮类替代物为环丙沙星-D8，磺胺类替代物为磺胺二甲氧嘧

啶-D6、大环内酯类替代物为脱水红霉素-D6。可用标准物质配制，标准物质纯度大于99.0%，用适量的

甲醇（5.4）溶解。也可直接购买有证标准溶液。贮备液应在-10℃以下避光保存或参照制造商的产品

说明。

5.20内标使用液：2.00μg/ml。将内标贮备液（5.18）用适量的甲醇（5.4）稀释。内标使用液于-10℃

以下避光保存，保质期1个月。

5.21替代物使用液：2.00μg/ml。将替代物贮备液（5.19）用适量的甲醇（5.4）稀释。替代物使用

液于-10℃以下避光保存，保质期1个月。

5.22固相萃取柱：填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）或同等柱效的萃取柱，规格为

6ml/500mg。

5.23滤膜：0.7μm玻璃纤维或其他材质等效滤膜。

5.24滤膜：0.22μm聚四氟乙烯或其它等效滤膜。

5.25氮气：纯度≥99.99%。

6仪器和设备

2

DB37/T3738—2019

6.1液相色谱-三重四极杆质谱仪：配有电喷雾离子化源（ESI）。

6.2固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。

6.3浓缩装置：自动氮吹浓缩仪或K-D浓缩器等性能相当的设备。

6.4色谱柱：填料粒径为1.8μm，柱长50mm，内径4.6mm的C18反相色谱柱，或其他等效色谱柱。

6.5样品瓶：1000ml带聚四氟乙烯内衬垫瓶盖的棕色玻璃瓶。

6.6微量注射器：10μl、20μl、50μl、100μl、250μl。

6.7一般实验室常用仪器和设备。

7样品

7.1样品采集与保存

按照HJ/T91和HJ/T164的相关规定采集样品。样品采集前，应向样品瓶（6.5）中加入150mg抗坏

血酸（5.7）及0.25g乙二胺四乙酸二钠（5.6），采样时应使样品充满样品瓶（6.5），不留液上空间。

样品采集后于现场立即加盐酸溶液（5.8）调节样品pH至2。

样品采集后应尽快进行分析。如暂不能分析，需在0℃～4℃冷藏避光保存，3d内分析完毕。

7.2试样制备

7.2.1样品预处理

样品采用固相萃取法富集前，先用孔径为0.7μm的玻璃纤维膜（5.23）过滤。

7.2.2固相萃取法

将固相萃取柱（5.22）固定在固相萃取装置（6.3）上。分别用5ml甲醇（5.4）、5ml去离子水、

5mlpH2.0去离子水（5.10）活化萃取柱，待萃取柱上pH2.0去离子水剩约2ml左右时，量取500ml

水样，加入25.0μl替代物使用液（5.21），用盐酸溶液（5.8）调节水样pH为2～4，水样以10～15ml/min

的流速全部通过萃取柱后，用5ml去离子水淋洗小柱，再用氮气（5.25）吹扫20min，使萃取柱干燥。

然后加入10ml甲醇（5.4）以5ml/min的流速洗脱，收集洗脱液。洗脱液经氮吹仪浓缩至近干，加入内

标使用液（5.20）25.0μl，用稀释溶剂（5.14）定容到1.0ml，过0.22μm（5.24）有机滤膜后待测。

7.3空白试样制备

以实验用水代替样品，按照与试样的制备（7.2）相同步骤进行实验室空白试样的制备。

8分析步骤

8.1仪器参考条件

8.1.1液相色谱参考条件

流动相：A相：0.1%甲酸甲醇/乙腈混合溶液（5.13）。B相：0.1%甲酸溶液（5.11）。

流速：0.3ml/min。

柱温：40℃。

进样体积：20μl。

3

DB37/T3738—2019

表1梯度洗脱程序

时间（min）流动相A（%）流动相B（%）

02575

22575

186040

206040

212575

252575

8.1.2质谱参考条件

离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子模式。

毛细管电压：4000V，干燥气体温度：350℃，雾化器压力：35psi。

干燥气体流速：10L/min。

多离子反应监测方式（MRM），具体条件参见附录B。对于不同质谱仪器，参数可能存在差异，测定

前应将质谱参数优化到最佳。

8.1.3仪器调谐

按照仪器使用说明书的要求在规定时间和频次内对液相色谱-三重四极杆质谱仪进行仪器质量轴和

分辨率调谐，使仪器处于最佳测试状态。

在仪器使用过程中，如发现仪器质量数出现明显偏差或灵敏度明显下降时，应立即重新对仪器进行

质量轴和分辨率调谐。

8.2校准曲线的建立

取一定量抗生素类化合物标准使用液（5.17）、内标使用液（5.20）及替代物使用液（5.21）于2ml

样品瓶中，制备至少5个浓度点标准系列，抗生素类化合物和替代物在各点的质量浓度分别为2.00μ

g/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L和200μg/L（参考浓度），内

标的质量浓度均为50.0μg/L。

由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进样，以标准系列溶液中目标组分的质量浓度为横坐标，其

对应的峰面积（或峰高）与内标物峰面积（或峰高）的比值乘以内标物浓度的乘积为纵坐标，建立校准

曲线。

8.3试样测定

按照与校准曲线的建立（8.2）相同的条件进行试样（7.2）测定。

8.4空白试验

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