DB5301/T 84-2023 人参果脱毒种苗生产技术规程

ICS65.202.20

CCSB21

DB5301

昆明市地方标准

DB5301/T84—2023

人参果脱毒种苗生产技术规程

2023-04-15发布2023-05-01实施

昆明市市场监督管理局发布

DB5301/T84—2023

目  次

前  言............................................................................III

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3术语和定义.........................................................................1

4脱毒种苗生产设施、设备及化学试剂...................................................2

4.1组培实验室.....................................................................2

4.2温室...........................................................................2

4.3仪器设备、玻璃器皿及试剂.......................................................2

5常用溶液的配制.....................................................................3

5.1MS培养基母液...................................................................3

5.2生长激素母液...................................................................3

6无菌苗的培养.......................................................................3

6.1无菌苗培养基的制备.............................................................3

6.2田间株选和外植体材料的采集.....................................................3

6.3外植体的处理和消毒.............................................................3

6.4离体培养无菌苗.................................................................4

7茎尖培养脱毒.......................................................................4

7.1钝化病毒.......................................................................4

7.2茎尖培养基的制备...............................................................4

7.3茎尖剥离与接种.................................................................4

7.4茎尖分生组织培养...............................................................4

7.5筛选脱毒核心苗.................................................................4

8基础苗扩繁和保存...................................................................5

8.1基础苗扩繁.....................................................................5

8.2基础苗保存.....................................................................5

9脱毒组培苗快繁.....................................................................5

9.1无菌操作要求...................................................................5

9.2脱毒组培苗接种.................................................................5

9.3脱毒组培苗培养.................................................................6

9.4脱毒组培苗继代或出瓶炼苗.......................................................6

10脱毒组培苗炼苗....................................................................6

10.1炼苗设施......................................................................6

10.2基质配制......................................................................6

10.3炼苗移栽......................................................................6

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10.4移栽后管理....................................................................7

10.5脱毒组培苗炼苗后质量标准......................................................7

11脱毒种苗扩繁......................................................................7

11.1设施..........................................................................7

11.2基质..........................................................................7

11.3扦插时间......................................................................7

11.4扦插材料来源与剪材要求........................................................8

11.5扦插..........................................................................8

11.6扦插后管理....................................................................8

11.7脱毒扦插种苗..................................................................8

12档案管理..........................................................................8

附录A（资料性）组培室规划........................................................10

附录B（资料性）组培设备、试剂....................................................11

附录C（资料性）MS培养基母液与相关培养基的配制...................................13

附录D（资料性）无菌操作注意事项..................................................16

附录E（资料性）人参果脱毒种苗繁育主要病虫害防治方法..............................17

附录F（资料性）人参果脱毒种苗主要质量指标........................................18

Ⅱ

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前  言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由昆明市农业农村局提出并归口。

本文件起草单位:昆明市农业科学研究院

本文件主要起草人:张丽芳、蒋瑜、杨春利、王薇、李荣琼、张力、朱维贤、李昌远、施林、刘平

江、杨永东。

III

DB5301/T84—2023

人参果脱毒种苗生产技术规程

1范围

本文件规定了人参果无菌苗的培养、茎尖培养脱毒、脱毒组培苗快繁及人参果脱毒种苗扩繁的技术

要求和操作规程。

本文件适用于人参果脱毒技术应用与脱毒种苗繁育。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T29375—2012马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程

NY/T401—2000脱毒马铃薯种薯（苗）病毒检测技术规程

3术语和定义

GB/T29375-2012界定的和下列术语和定义适用于本文件，为了便于使用，以下重复列出了GB/T

29375-2012的部分术语和定义。

3.1

外植体explant

指植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段，本标准中是指用于无菌苗培养的人参果

植株顶芽、腋芽及茎段等不同部位的材料。

3.2

离体培养in-vitropropagation

从植物体分离出符合需要的器官、组织、细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进

行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其它产品的技术。

[来源：GB/T29375—2012，3.4]

3.3

无菌苗asepticseedlings

指在无菌条件下，将从大田人参果健康植株上获得的顶芽、腋芽及茎段严格按外植体的消毒流程进

行消毒后，接种到MS培养基（可添加或不添加激素）上，在人工控制条件下，通过无菌培养获得的完整

植株。

3.4

茎尖stemapex

芽顶端部分（0.1mm～10mm）其中包括分生组织（0.05mm～0.1mm）及芽原基和正在生长发育的

叶原基。

[来源：GB/T29375—2012，3.2]

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3.5

茎尖分生组织stem-apexmeristem

茎部位具有持续或周期性分裂能力的细胞群。

[来源：GB/T29375—2012，3.3]

3.6

叶原基leafprimordium

在茎尖生长点的侧面由表面的几层细胞分裂形成的突起。

3.7

脱毒核心苗virus-freecoreplantlets

通过茎尖分生组织培养技术获得的经检测不带危害该种植物的主要病毒，不带任何细菌和真菌、品

种纯正的再生试管苗。

3.8

基础苗basicplantlets

由脱毒核心苗繁殖的、经检测无病毒的脱毒苗。

[来源：GB/T29375—2012，3.7]

3.9

炼苗acclimatization

组培苗在培养瓶中长成完整的植株后，从培养瓶中取出移植到基质中，使其适应外界温度、湿度及

光照等自然环境条件的锻炼过程。

3.10

脱毒种苗virusfreeseedlings

本标准中脱毒种苗指由基础苗快繁培育出的脱毒组培苗并经隔离温室炼苗后直接应用于大田生产

的种苗或脱毒组培苗炼苗后作为母苗，剪取顶芽、茎段在隔离温室进行二次扦插繁育生产的经检测合格

的扦插种苗。

4脱毒种苗生产设施、设备及化学试剂

4.1组培实验室

组培实验室应建设在向阳、通风、干燥、清洁的环境，周围应无污染源，与大田生产隔离。组培实

验室要具备清洗室、配制室、灭菌室、无菌贮存室、缓冲间、更衣室、接种室、培养室等，各房间应隔

离，各房间面积根据生产实际需要而定。各功能区布局应遵守操作流程，遵循方便消毒、减少污染的原

则。组培实验室布局平面示意图参见附录A。

4.2温室

脱毒组培苗炼苗和扦插繁育设施可采用智能温室或钢架大棚，周围200m～500m范围内没有茄科

作物病虫害浸染源或蚜虫、蓟马等寄主植株种植，设施四周通风口应安装40目～60目防虫网，温室或

大棚的面积可根据生产实际和条件而定。

4.3仪器设备、玻璃器皿及试剂

4.3.1仪器设备、玻璃器皿

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仪器设备包括用于药品称量、培养基配制、灭菌、接种、温度控制等，玻璃器皿包括盛装器皿（烧

杯、试剂瓶等）、培养容器（培养瓶）、计量器皿（量筒、容量瓶等）以及其他常用玻璃消耗品等。仪

器设备和玻璃器皿参见附录B。

4.3.2试剂

植物组培中常用的试剂包括无机盐类、有机物、植物生长调节剂、消毒剂等。试剂参见附录B和附

录C。

5常用溶液的配制

5.1MS培养基母液

MS培养基母液配制参见附录C表C.1～C.4。

5.2生长激素母液

激素类母液配制方法参见附录C表C.5。

6无菌苗的培养

6.1无菌苗培养基的制备

无菌苗培养基制备方法参见附录C。

6.2田间株选和外植体材料的采集

6.2.1田间株选

在第一台果基本成熟时，选择具有该品种典型特性、植株长势好、结果率高、抗病性强、无病斑的

单株作为无菌苗培养的基础材料。

6.2.2采集外植体

剪取优选单株中间部位新萌发的枝条约20cm，装入干净的塑料自封袋，并标记。

6.3外植体的处理和消毒

6.3.1修剪

用75％酒精消毒过的剪刀剪取外植体枝条上3cm～4cm长的顶芽和腋芽及枝条中部带1～2个节的茎

段。

6.3.2清洗

将修剪好的外植体在流水下用软毛刷轻轻逐个刷洗后放于烧杯中，用纱布封口，放于自来水下冲洗

10min～20min。

6.3.3消毒

在超净工作台上，先用75％的酒精浸泡外植体15s，无菌水冲洗2次，再用0.1％的升汞浸泡10min～

12min，浸泡时不间断摇荡瓶子，以确保外植体得到较彻底的消毒，最后用无菌水冲洗5～6次。

3

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6.4离体培养无菌苗

6.4.1接种

无菌接种操作按附录D的规定执行。在超净工作台上，对处理好的外植体进行剪切，切除被药剂伤

害的部分，接种至已备好的无菌苗培养基上，每个培养基上接一个外植体，在培养容器上注明品种名称

和接种时间。

6.4.2培养

将接种好的外植体置于培养室，培养20d～28d，待长成含4～5片叶子的小苗时，剪切成单节段，

转接于同样的新培养基上，培养成完整无菌小植株。同样方法扩繁1个～2个周期，增加无菌苗的数量。

培养条件：白天温度22℃～25℃、夜间16℃～20℃，相对湿