DB61/T 1134-2018 番茄黄化曲叶病毒检验鉴定方法

ICS65.020.01

B16

DB61

陕西省地方标准

DB61/T1134—2018

番茄黄化曲叶病毒检验鉴定方法

DetectionandidentificationofTomatoyellowleafcurlvirus

2018-04-10发布2018-05-10实施

陕西省质量技术监督局发布

DB61/T1134—2018

目  次

前  言..............................................................................................................................................................II

1范围.................................................................................................................................................................1

2规范性引用文件.............................................................................................................................................1

3番茄黄化曲叶病毒基本信息.........................................................................................................................1

4方法原理.........................................................................................................................................................1

5实验用仪器设备、用具及试剂.....................................................................................................................1

6取样和样品制备.............................................................................................................................................2

7检测方法.........................................................................................................................................................2

8结果判定.........................................................................................................................................................2

9结果记录与样品、资料保存.........................................................................................................................2

10安全...............................................................................................................................................................3

附录A（规范性附录）TYLCV相关资料.........................................................................................................4

附录B（规范性附录）双抗体夹心酶联免疫吸附测定方法.......................................................................7

附录C（规范性附录）普通PCR检测方法.................................................................................................11

附录D（规范性附录）实时荧光PCR检测方法.........................................................................................14

附录E（规范性附录）生物学接种..............................................................................................................16

I

DB61/T1134—2018

前  言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由陕西省农业厅提出并归口。

本标准起草单位：陕西省生物农业研究所、陕西省园艺蚕桑技术工作站、陕西学前师范学院。

本标准主要起草人：李英梅、杨苗苗、王周平、刘晨、张伟兵、张锋、洪波、陈志杰、张淑莲。

本标准由陕西省生物农业研究所负责解释。

本标准首次发布。

联系信息如下：

单位：陕西省生物农业研究所

电话：029—82291059

地址：西安市咸宁中路125号

邮编：710043

II

DB61/T1134—2018

番茄黄化曲叶病毒检验鉴定方法

1范围

本标准规定了番茄黄化曲叶病毒酶联免疫吸附DAS-ELISA、普通PCR、实时荧光定量PCR检测方法。

本标准适用于番茄种苗及传毒介体中携带的番茄黄化曲叶病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

GB/T23629-2009引进植物病原生物安全控制技术要求

3番茄黄化曲叶病毒基本信息

中文名：番茄黄化曲叶病毒

英文名：tomatoyellowleafcurlvirus

英文缩写：TYLCV

分类地位：双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）

番茄黄化曲叶病毒其他信息见附录A。

4方法原理

通过基于抗原抗体反应的双抗夹心酶联免疫吸附DAS-ELISA、普通PCR、实时荧光定量PCR进行检测

鉴定。

5实验用仪器设备、用具及试剂

5.1仪器设备

酶联检测仪、洗板机、高速冷冻离心机、PCR仪、荧光定量PCR仪、电子天平（感量，1/10000g）、

电泳仪、电泳槽、紫外投射仪、凝胶成像系统、恒温水浴、低温冰箱、液氮罐、隔离温室等。

5.2用具

可调式微量移液器（0.5μL、2μL、10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL）、96孔光化学PCR

反应板、酶联板、离心管、PCR管、研钵等。

5.3试剂

酶联测定试剂，PCR检测试剂，除有特殊说明外，均为分析纯或生化试剂。

1

DB61/T1134—2018

6取样和样品制备

6.1取样

6.1.1疑似被TYLCV感染的番茄植株取样方法：取疑似发病植株顶部叶片2片～3片，-20℃储存备用。

6.1.2无TYLCV感染症状番茄植株取样方法：在番茄田随机选5点，每点随机选5株，每株取顶部叶

片2片～3片，-20℃储存备用。

6.1.3若在取样过程中发现烟粉虱，应随机采集烟粉虱，-20℃储存备用。

6.2实验室样品制备

6.2.1植物样品：将每份10g待测番茄叶片放入研钵后加入液氮研磨，取100mg按照植物基因组试剂

盒抽提番茄叶片总DNA，-20℃保存所提DNA。

6.2.2烟粉虱样品：取单头烟粉虱按照动物基因组提取试剂盒抽提DNA，-20℃保存所提DNA。

7检测方法

7.1酶联免疫吸附测定方法见附录B。

7.2PCR检测方法见附录C。

7.